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猪链球菌2型是重要的人畜共患病原菌，能引起猪患肺炎、脑膜炎等多种疾病，不仅影响养猪业，而且威胁从业人员的安全，引起人们的高度重视。猪链球菌2型的致病性与其毒力因子有关，其中胞外蛋白因子（extracellular factor protein，EF）是一种重要的毒力因子。从健康猪分离的猪链球菌2型常为EF-，从病猪分离的猪链球菌2型常为EF+，而猪链球菌2型人分离株常含有EF*（分子量稍大的EF类似物），可见EF与致病性密切相关。国内外对EF进行了大量研究，但对其结构和功能所知仍甚少。本试验根据DNAStar软件分析，克隆表达epf抗原表位基因，通过动物试验证实表达的蛋白是否具有保护作用，为进一步研究其结构和功能、研制亚单位疫苗提供依据。1 胞外蛋白因子基因片段的克隆与表达按照Genbank中的epf基因序列，利用DNAStar软件分析，选取epf抗原表位基因序列，设计一对引物，两端分别加限制性酶切位点EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ，经克隆表达得到分子量为53000的重组蛋白，免疫印迹表明该片段是EF的重要功能区，具有EF的抗原表位。2 重组蛋白的纯化和抗血清的制备猪链球菌2型胞外蛋白因子（EF）的重组蛋白含有6个组氨酸残基，利用与Ni2+结合的特性，经Ni-NTA His·Bind Resin分别进行自然和变形条件纯化后，得到单一条带的目的蛋白。将目的蛋白用弗氏佐剂乳化后免疫兔，制备多抗，间接ELISA检测抗体效价，分别为1:1000、1:2000，可用于EF的检测。3 溶菌酶释放蛋白及胞外蛋白因子融合蛋白对小鼠的免疫保护试验诱导已知具有抗原表位的两种重组菌，表达重组溶菌酶释放蛋白（rMRP）及重组胞外蛋白因子（rEF），分别或联合与弗氏佐剂混合、乳化，免疫Balb／c小鼠，并以全菌灭活苗SS2-H作对照。二免后用SS2-H活菌攻击，并分离rMRP／rEF组及全菌灭活疫苗组小鼠的血清，间接ELISA测定效价。结果显示，rMRP／rEF组rMRP、rEF的抗血清效价均为1:20000；全菌灭活疫苗组rMRP的抗血清效价为1:400，rEF的抗血清效价检测不到。rMRP／rEF及全菌灭活疫苗免疫鼠具有较好的保护率，为80％（8／10）及90％（9／10），而rMRP、rEF单独免疫力较差，为1／5和0。结果提示，猪链球菌2型的免疫保护性抗原不仅限于一种毒力因子。