钙超载和细胞凋亡在氟斑牙形成中的作用

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目的:  氟斑牙是在牙齿发育时期摄入过量的氟,导致牙釉质形成和发育障碍。病因明确,但形成机制尚不完全清楚。本研究应用体外培养大鼠牙源性上皮细胞系细胞(HAT-7)即成釉细胞系,观察不同浓度的氟化物对成釉细胞的影响,探讨钙超载和细胞凋亡在氟斑牙形成中的作用。  方法:  选择大鼠牙源性上皮细胞系(Dental Epithelial Cell Line,HAT-7)即成釉细胞系,应用不同浓度的NaF孵育24、48、72小时,CCK-8法观察氟对成釉细胞活性的影响;激光共聚焦技术检测细胞内Ca2+浓度;荧光核染色及流式细胞术观察并检测氟对成釉细胞凋亡的影响。Western-blot和Real-time RT-PCR技术检测成釉细胞中caspase-12、Calreticulin在蛋白和mRNA水平的变化。  采用SPSS13.0软件完成统计处理。差异显著性采用单因素方差分析(ANOVA)。以P<0.05为差异有统计学意义。GraphPad Prism 5软件作图。  结果:  氟浓度为1.6、3.2mmol/L时,对细胞的活性有抑制作用,并且促进细胞的凋亡。共聚焦显微镜结果表明,1.6、3.2mmol/LNaF孵育的成釉细胞Ca2+平均荧光强度均高于对照组,有显著性差异(P<0.05),并且NaF浓度越高,Ca2+荧光强度也越高。  Western-blot和Real-time RT-PCR实验表明,不同浓度的NaF孵育HAT-7细胞48小时后,caspase-12、Calreticulin表达均高于对照组,有显著性差异(P<0.05)。  结论:  1、过量氟可引起HAT-7细胞内Ca2+浓度升高,发生“钙超载”现象。  2、NaF浓度为1.6、3.2mmol/L时,可诱导成釉细胞发生凋亡。
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