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目的:通过研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E2蛋白与Daxx在人急性单核细胞性白血病细胞(THP-1)和人宫颈癌细胞(C-33A)中的相互作用及其对细胞凋亡的影响,为进一步阐明HPV16 E2蛋白在HPV16致癌中的作用及其机制奠定试验基础。方法:(1)将重组质粒pc DNA3.1(+)/HPV16 E2瞬时转染C-33A、THP-1细胞,通过间接免疫荧光试验分析HPV16 E2和Daxx蛋白在两种细胞内的分布与定位。(2)将重组质粒pc DNA3.1(+)/HPV16 E2瞬时转染C-33A细胞,通过免疫共沉淀和Western blot检测HPV16 E2蛋白与Daxx蛋白在细胞内的相互作用。(3)将重组质粒pc DNA3.1(+)/HPV16 E2瞬时转染或与重组质粒pc DNA3.1(-)/Daxx共转染C-33A、THP-1细胞,通过q RT-PCR或Western blot分别检测Daxx基因或Daxx蛋白在细胞内的表达水平。(4)将重组质粒pc DNA3.1(+)/HPV16 E2瞬时转染C-33A、THP-1细胞12h、24h、36h、48h,经MTT染色后,C-33A细胞检测OD490值,THP-1细胞检测OD570值,并计算两种细胞的增殖抑制率;采用流式细胞术测定细胞周期各时相比率和细胞凋亡率。结果:(1)在倒置荧光显微镜下,观察到显红色信号的HPV16 E2蛋白与显绿色信号的Daxx蛋白均分布于C-33A、THP-1细胞核,两种信号融合后成黄色信号。(2)免疫共沉淀及Western blot检测到HPV16 E2蛋白与Daxx蛋白在C-33A细胞内有相互作用。(3)HPV16 E2瞬时高表达时,在C-33A、THP-1细胞内,Daxx基因水平及蛋白质表达水平均升高;共转染质粒HPV16 E2和Daxx后,两种蛋白质表达量均增加。(4)HPV16 E2瞬时高表达时,与对照组相比,C-33A、THP-1细胞抑制率明显升高(P<0.05);细胞G1期延长(P<0.05);细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:(1)HPV16 E2与Daxx在C-33A细胞内有相互作用。(2)HPV16 E2高表达能增加C-33A、THP-1细胞内Daxx的表达水平,并可以抑制细胞增殖,延长细胞G1期,增加细胞凋亡率。