目的:　　利用CRISPR-Cas9系统从基因组水平上分别敲除编码基因MKL1和长链非编码RNA HOTMR。为研究在宫颈癌中MKL1与HOTAIR的作用，构建二者缺失型HeLa细胞株，扩大该系统的应用范围。同时，利用这两种细胞体系验证MKL1和HOTAIR的细胞功能;建立二者与肿瘤抑制因子间的联系，为两者功能机制的研究提新出方向。　　方法:　　首先构建出稳定表达Cas9核酸酶的HeLa细胞株。其次，分别设计特异性靶向MKL1和HOTAIR基因的pgRNA引物，克隆其表达质粒，导入上述细胞株，构建相应的CRISPR-Cas9系统。细胞经药物筛选后，利用Western Blot蛋白分析和qRT-PCR定量分析分别确定MKL1和HOTAIR的敲除效率。通过MTT实验与细胞划痕实验检测目的基因缺失型HeLa细胞株增殖与迁移的变化。同时，提取这两类细胞株的RNA，qRT-PCR测定肿瘤抑制因子p21，p53，pRB以及DLC1转录水平的变化。其中针对MKL1对DLC1的调控进一步探究，利用生物信息学分析DLC1启动子序列，检测在HeLa细胞中过表达MKL1对DLC1表达水平的影响，同时构建启动子突变型荧光素酶报告基因质粒，配合ChIP实验验证MKL1对DLC1的调控作用。　　结果:　　利用稳定表达Cas9核酸酶的HeLa细胞株分别构建了靶定MKL1和HOTAIR基因的CRISPR-Cas9系统。Western Blot蛋白分析与qRT-PCR定量分析分别显示MKL1基本被敲除，而lncRNA HOTAIR表达只下调60％，未完全敲除。随后MTT实验表明MKL1缺失以及HOTAIR下调的HeLa细胞一周内增殖数量少于对照组;细胞划痕实验也显示这两类细胞的划痕愈合速度低于对照组。对于相关肿瘤抑制因子的影响，qRT-PCR检测显示MKL1缺失时，p53转录水平无明显变化，DLC1的下调80％，而p21与pRB上升1.5倍左右;HOTAIR下调时，DLC1和p53转录水平下调，而p21和pRB的转录水平明显上调。生物信息学分析得知DLC1上游1000bp启动子内含有两个CArG box序列;MKL1的过表达会上调DLC1的转录表达，同时ChIP实验和荧光素酶报告基因实验表明MKL1在DLC1启动子上有结合，且两个CArG box分别突变都会抑制DLC1的转录。　　结论:　　该实验在CRISPR-Cas9系统中应用pgRNA可显著敲除MKL1，而对lncRNAHOTAIR的敲除并不彻底，令其下调60％，具体原因还有待实验探究。此外，MKL1缺失及HOTMR下调皆可抑制HeLa细胞的增殖和迁移，并对不同肿瘤抑制因子的转录水平有不同的影响，暗示MKL1和HOTAIR可通过调控肿瘤抑制抑制参与细胞周期的调控，同时也为MKL1和HOTAIR新的作用机制研究提供了方向。如该实验研究发现MKL1可通过与DLC1启动子上的CArG box结合从而促进后者的转录表达。该实验结果表明了应用的pgRNA-Cas9系统敲除目的基因的应用价值与其局限性，而对于MKL1和HOTAIR对其他肿瘤抑制因子调控的具体机制，则有待在后续实验中进一步探究。