论文部分内容阅读
本研究以芝麻白绢病菌(Athelia rolfsii)为指示菌,对枯草芽孢杆菌菌株Bv10的发酵条件、抗菌物质的纯化、胞外抗菌物质的理化性质、抗菌物质的部分作用机制及其毒力和盆栽防效进行了研究。取得的主要研究结果如下：1、最适培养菌株Bv10的条件为：温度30℃、初始pH值为8.0、接种量为3%、装液量为100mL/250mL的三角瓶、转速为170rpm、最佳培养时间是5d。菌株Bv10生长和高产抗菌物质的培养基配方(w/v)为：麦芽糖3.0%,NH4Cl0.5%,牛肉浸膏0.5%,K2HPO43.0%, MgSO4·7H2O0.5%。2、该抗菌粗提取物对热稳定,但121℃高压下,随着处理时间的延长,热稳定稍下降。在pH7-9的范围内,菌株Bv1O产生的抗菌物质的抑菌活性较稳定。抗菌物质置于日光灯和自然光下照射1-5d,活性没有改变。胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、果胶酶对该抗菌物的抗菌活性也没有影响。此外,菌株Bv10产生的抗菌粗提物能溶于磷酸缓冲液、甲醇、水,不溶于丙酮、乙腈、二氯甲烷。菌株Bv10产生的抗菌粗提取物对14种植物病原真菌[向日葵细交链格孢菌Alternaria alternata、污斑拟盘多毛孢Pestalotiopsis foedans、苹果轮纹病菌Botryosphaeria berengeriana f. sp. piricola、粉红聚端孢菌Trichothecium roseum、瓜果腐霉Pythium aphanidermatum、香蕉褐缘灰斑病菌Pseudocercospora musae、山茱萸叶枯病菌Botryosphaeria dothidea、莴苣灰霉病菌Botryotinia fuckeliana、芝麻白绢病菌Athelia rolfsii、玉米穗腐病菌(Gibberella zeae、Fusarium equiseti、G. moniliformis、 F. proliferatum)、大叶黄杨炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides]和两种非植物病原真菌(毛壳霉Chactomium globosum、脉永孢菌Gelasinospora brevispora)的生长有较好的抑制作用,对终极腐霉Pythium ultimum和芝麻疫病菌Phytophthora sp.无抑制作用。对5种病原细菌(水稻细菌性条斑病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzicola、水稻白叶枯病菌X. oryzae pv. oryzae、辣椒青枯病菌Ralstonia solanacearum、柑橘溃疡病菌Xanthomomas campestris pv. citri和番茄细菌性斑点病菌Pseudomonas syringae pv. tomato)有抑制作用,对胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacterium carotovora没有作用。3、经盐酸沉淀、甲醇萃取以及反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法,从菌株Bv10的无菌发酵液中提取和纯化到A和B两种对芝麻白绢病菌具有较强抑制作用的活性物质,其分子量分别为1042Da和1057Da。MALDI-TOF-MS/MS CID质谱分析两种纯化物的分子的一级结构均为Pro-Asn-Ser-β AA-Asn-Tyr-Asn-Gln,将纯化物A鉴定为脂肽化合物伊枯草菌素iturin A2,将纯化物B鉴定为iturin A4。4、纯化物A和B浓度都为200mg·L-1时可以完全抑制芝麻白绢病菌菌核的萌发,当纯化物的浓度为100mg·L-1和50mg·L-1时,纯化物A对菌核萌发的抑制率分别为82.22%和73.33%,纯化物B对菌核萌发的抑制率分别为77.78%和68.89%。显微镜下观察到受抑制的菌丝体扭曲变形,生长紊乱,分隔处缢缩,甚至在分枝处断裂,菌丝顶端膨大,原生质体凝聚,顶端成囊泡状。5、纯化抗菌物质A和B对芝麻白绢病菌的抑菌中浓度ECso值分别为36.7866mg·L-1和43.0329mg.L-1。在盆栽防治试验中,先施药后接种的处理区中,菌株Bv10粗提物(1×105mg·L-1)和无菌发酵液对芝麻白绢病的防治效果分别为77.42%和39.82%；先接种后施药的处理区中,菌株Bv10粗提物(1×105mg·L-1)和无菌发酵液对芝麻白绢病的防治效果分别为68.69%和30.30%。