第一部分取卵日脑源性神经营养因子与辅助生育结局及胚胎发育的相关性目的：评估取卵日脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor, BDNF)与卵母细胞成熟之间的相关性,并进一步探讨BDNF能否预测体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的妊娠结局。方法：总共59例在北京协和医院妇产科生殖中心进行单精子胞浆内注射(ICSI)患者纳入研究。在取卵日清晨留取血清、卵泡液并分别测量BDNF,E2和P的浓度。根据患者妊娠与否分为妊娠组和非妊娠组,比较两组之间的临床和实验室的相关数据,并分析BDNF与E2,P,年龄和IVF相关数据之间的相关性。结果：妊娠与非妊娠组的临床和实验室的各项参数均无明显统计学差异；取卵日血清中BDNF与E2,P分别呈正相关,而且BDNF与获卵数和成熟卵数分别呈正相关。卵泡液中BDNF与E2呈明显正相关,但是与P无明显相关性。卵泡液BDNF与卯母细胞成熟率和卵裂率成正相关。结论：尚不能用取卵日BDNF来预测IVF的妊娠结局,但是BDNF可能在卵母细胞成熟和卵母细胞发育为移植前胚胎的过程中发挥着重要作用。第二部分脑源性神经营养因子在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响目的：近年来随着社会和环境条件的改变,不孕症的患病率逐年增加,很多患者最终需要借助IVF来实现生育的目的。但是胚胎在体外的发育能力差于体内发育,获得的优质胚胎率和囊胚形成率非常低,导致新鲜移植的妊娠率较低,而且发育至囊胚期的胚胎数较少,可以冷冻保存的细胞数减少,从而导致累计妊娠率低下。因此寻求方法来维持胚胎的活性,提高植入前胚胎的发育能力对提高妊娠率是非常重要的。研究发现在胚胎植入前后,生殖道或胚胎自身能够产生大量生长因子和细胞因子,与特异性受体结合后,通过某种自分泌或旁分泌的方式促进植入前胚胎的早期发育以及胚胎的种植。脑源性神经营养因子(BDNF)不仅能够在神经系统发挥重要作用,也能够在生殖系统促进卵巢发育、卵母细胞成熟和早期胚胎发育。因此,本研究的目的是探讨BDNF在植入前小鼠胚胎中的表达规律和分布情况,以及BDNF对小鼠早期胚胎发育和着床过程中的重要性,从而为提高植入前胚胎的发育补充新的理论依据。本研究内容主要包括三个方面：①胚胎在体外发育过程中是否必须激活TrkB受体；②加入BDNF的培养基对胚胎发育和囊胚形成是否具有促进作用；③BDNF促进胚胎体外发育的时间点和剂量。方法：雌性ICR小鼠超排卵后与雄鼠交配,在妊娠1-4天上午冲洗输卵管或子宫角获得相应时期的胚胎用于以下实验：①分别提取不同时期胚胎中的总RNA,利用real time RT-PCR检测BDNF及其受体TrkB在各阶段胚胎中的表达情况；②利用免疫细胞化学技术,观察BDNF及TrkB蛋白在囊胚中的表达和分布情况；③收集2细胞胚胎,分别在不同时期添加不同浓度的BDNF培养基中培养,观察胚胎的发育情况,并比较BDNF促进胚胎体外发育的最佳时间点和最佳剂量；④收集2细胞胚胎,在含BDNF的培养基中,添加或不添加TrkB受体阻断剂k252a或k252b,观察胚胎发育情况,从而验证外源性BDNF对胚胎发育的作用；⑤收集2细胞胚胎,在序贯培养基中加入不同浓度的TrkB受体阻断剂k252a或k252b,观察阻断内源性BDNF后的胚胎发育情况；⑥收集③-⑤中的囊胚进行双重免疫荧光,对囊胚滋养细胞和内细胞团细胞分别计数。⑦在hCG后72h,76h,84h和88h分别腹腔注射10μ g K252a、k252b(阴性独照),计算扩张期囊胚数和囊胚细胞数。其余小鼠继续培养至孕14天,观察已着床胚胎数和胚胎发育情况。结果：BDNF及TrkB均表达于小鼠植入前各阶段的胚胎中,在培养基中添加BDNF后能够促进小鼠植入前胚胎的体外发育,提高囊胚形成率和囊胚孵化率,提高囊胚细胞数,尤以受精卵在体外培养的全过程中添加效果最显著,最佳剂量为10ng/ml。 BDNF的作用能够通过TrkB受体阻断剂k252a阻断。一定浓度的TrkB受体阻断剂能够明显降低囊胚形成率和囊胚孵化率,并且随阻断剂浓度的增加,这种抑制作用更明显。体内研究进一步证实k252a处理后能够通过抑制囊胚细胞数而明显抑制早期胚胎发育。结论：BDNF/TrkB信号系统可能通过某种自分泌或旁分泌的作用方式促进植入前胚胎的发育,同时也可能参与了胚胎的着床过程。