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目的:通过5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对B细胞淋巴瘤(Raji细胞)CHFR基因过表达及慢病毒介导的Sh RNA沉默Raji细胞CHFR基因表达,分别检测CHFR、PARP-1基因的表达水平及对Raji细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨CHFR基因与PARP-1基因表达及对B细胞淋巴瘤增殖和凋亡的影响。方法:1.收集对数生长期生长良好的Raji细胞,随机分为空白组(未做任何处理)、实验组(加入5-Aza-dC试剂),通过q RT-PCR检测两组CHFR、PARP-1的mRNA表达水平,Western blot检测CHFR、PARP-1的蛋白表达。2.收集对数生长期生长良好的Raji细胞,随机分为三组,空白组(未加慢病毒载体)、阴性对照组(加入阴性对照慢病毒载体)、实验组(加入慢病毒载体),构建慢病毒载体,将慢病毒以不同MOI值感染Raji细胞,72小时后通过荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,确定最佳MOI=15。3.将构建完成的慢病毒载体以最佳MOI值转染阴性对照组、实验组Raji细胞,转染后72小时通过荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,并用q RT-PCR、western blot法分别检测三组CHFR、PARP-1表达。依照CCK-8试剂盒说明书要求检测空白组、阴性对照组、实验组Raji细胞增殖。流式细胞术检测空白组、阴性对照组、实验组Raji细胞的凋亡。结果:1.CHFR的mRNA表达,空白组为(1.00±0.0),实验组(1.613±0.101),实验组较空白组表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。经5-Aza-dC处理Raji细胞后,通过q RT-PCR检测各组PARP-1mRNA,空白组(1.513±0.016)、实验组(1.126±0.025),实验组较空白组表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测CHFR蛋白表达,空白组(0.0871±0.010)、实验组为(0.4984±0.008),实验组较空白组蛋白表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。PARP-1蛋白表达为空白组(0.6825±0.012)、实验组(0.3758±0.006)实验组较空白组蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.经慢病毒介导的Sh RNA感染Raji细胞72小时后,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光,计算感染效率,细胞转染效率大于80%。经预实验验证最适的MOI值=15。用q RT-PCR检测空白组、阴性对照组、实验组Raji细胞中的CHFR基因表达,mRNA相对表达量分别为空白组(1.00±0.0)、阴性对照组(0.936±0.103)、实验组(0.607±0.021),显示实验组基因较空白组、阴性对照组表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。PARP-1mRNA相对表达量分别为空白组(1.237±0.002)、阴性对照组(1.301±0.010)、实验组(1.485±0.006),实验组表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测显示CHFR、PARP-1与mRNA表达一致。CHFR蛋白表达量空白组(0.8233±0.003)、阴性对照组(0.4111±0.002)、实验组(0.1524±0.003)实验组蛋白较空白组、阴性对照组表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),PARP-1蛋白相对表达量分别为空白组(0.3503±0.002)、阴性对照组(0.4468±0.011)、实验组(0.8747±0.001),实验组蛋白较空白组、阴性对照组表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.CHFR基因表达沉默后,24h各组细胞OD值实验组(0.8732±0.011)、阴性组(0.5562±0.009)、空白组(0.6631±0.002);48h各组细胞OD值Sh RNA组(1.5976±0.003)、阴性组(1.2615±0.104)、空白组(1.3672±0.010),与空白组和阴性组对照比较实验组Raji细胞增殖明显加快,差异有统计学意义(P<0.05)。各组细胞凋亡率分别为:空白对照组(15.27±2.11)%、阴性对照组(20.23±1.8)%、实验组(9.57±0.9)%,CHFR基因沉默后Raji细胞凋亡率降低实验组凋亡率较空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、5-Aza-dC可以过表达CHFR基因和蛋白的表达。2、慢病毒介导的Sh RNA能下调Raji细胞中CHFR基因和蛋白的表达。3、通过5-Aza-dC过表达CHFR基因,可下调PARP-1基因,细胞的增殖降低,凋亡率显著升高;通过慢病毒Sh RNA感染Raji细胞,沉默CHFR基因,PARP-1基因表达升高,细胞的增殖率升高,细胞调亡明显降低。4、CHFR基因可能通过调控PARP-1基因表达影响淋巴瘤细胞的增殖和凋亡;5、CHFR基因、PARP-1基因在Raji细胞的增殖和凋亡中具有重要的作用,可作为非霍奇金淋巴瘤治疗潜在靶点。