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目的:研究RSV激活SIRT1在EAM发展至DCM过程中的作用,探讨SIRT1去乙酰化对TGF-β1/Smad3信号通路的影响及其与心肌纤维化的关系。方法:(一)制备EAM/DCM模型:30只雄性Lewis大鼠随机分为两大组,(1)实验组,于实验第0d、7d在大鼠左右后肢足垫注射猪心肌肌球蛋白与弗氏完全佐剂混合乳化液;(2)正常对照组,用PBS代替猪心肌肌球蛋白进行注射。两大组再按21d、56d和90d时间点分成三个亚组。对各组大鼠进行心脏超声检测后处死,称量心脏重量与体重;取心脏组织行HE、MASSON和苦味酸-天狼猩红染色染色;RT-QPCR技术检测ColⅠ、ColⅢm RNA的表达水平。(二)RSV干预:20只雄性Lewis大鼠随机分为四组:正常对照组、DCM组、RSV低剂量组(10mg/kg/d)、RSV高剂量组(50 mg/kg/d),每组5只。同上述构建模型,于初次免疫后28d起,灌胃干预,每日一次。于初次免疫第90d后同上述方法实行心脏超声检测,称重,病理学检查,RT-QPCR检测心脏组织ColⅠ、ColⅢ、SIRT1m RNA的表达水平;免疫共沉淀和Western-blot检测SIRT1、p-Smad3、Ac-Smad3蛋白表达以及SIRT1与Smad3的相互作用。结果:(一)实验组与同期正常对照组比较1.心脏彩超:第21d、56d、90d实验组LVEDD、LVESD增加(P<0.01),第56d、90d实验组左心室收缩功能明显减退,LVEF、FS明显降低(P<0.01)。2.MASSON染色与苦味酸天狼猩红染色,见心脏胶原纤维56d明显增多,90d弥漫性增加,呈大片网格状改变。偏振光显微镜下,以Ⅰ型胶原增加为主。3.第21d实验组ColⅠm RNA表达增高(P<0.05),ColⅢm RNA无明显改变(P>0.05);56 d与90d实验组ColⅠ、ColⅢm RNA表达呈进行性升高(P<0.01)。(二)RSV干预结果1.超声心动图检测:与DCM组相比,RSV干预组LVEDD、LVESD明显降低,LVEF、FS明显增加(P<0.01)。2.MASSON染色与苦味酸天狼猩红染色,DCM组心脏胶原纤维明显增多,偏振光显微镜下,见Ⅰ、Ⅲ型胶原大量增生,RSV低剂量组有所减少,RSV高组明显减少。3.RSV低剂量组ColⅠ、ColⅢm RNA低于DCM组,高于正常对照组和RSV高剂量组(P<0.01),SIRT1 m RNA表达高于DCM对照组和正常对照组,低于RSV高剂量组(P<0.01)。4.DCM组p-Smad3和Ac-Smad3的表达明显高于正常对照组,RSV干预组p-Smad3均未显著下调。DCM组SIRT1表达量明显降低,Ac-Smad3表达显著升高。RSV低剂量组Ac-Smad3表达低于DCM对照组,高于RSV高剂量组。结论:1.用猪心肌肌球蛋白免疫大鼠,能制备出EAM模型,晚期发展为DCM。2.DCM发展过程中,心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量显著增高,尤以Ⅰ型胶原合成增多为主。3.RSV能够活化SIRT1,促进Smad3的去乙酰化作用,通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,减轻心肌纤维化,其作用与RSV剂量相关。