本研究主要探讨水牛卵母细胞体外成熟和受精后早期胚胎的培养程序及水牛卵巢颗粒细胞体外培养体系,为生产更多的优质胚胎提供保证。同时还探讨了水牛胚胎分割技术,以进一步提高胚胎分割的生产效率。本文具体研究内容分为如下四个部分:　　 研究Ⅰ,探讨了在成熟液及培养液中分别添加不同浓度(0μL/mL、5μL/mL、10μL/mL、20μL/mL)的胰岛素一转铁蛋白一硒(insulin,transferrinandselenitim,ITS)对水牛卵母细胞体外成熟及体外受精后早期胚胎发育的影响。统计结果显示:(1)在本试验体系下,在成熟液中添加ITS有利于卵母细胞的体外成熟和受精后早期胚胎的发育,且以添加10μL/mL的ITS的效果最佳;(2)在本试验培养体系下,在胚胎培养液中添加ITS有利于受精后水牛早期胚胎的发育,且以添加20μL/mL的ITS的效果最佳。　　 研究Ⅱ,研究了水牛卵母细胞成熟前亮甲酚蓝(brilliantcresylblue,BCB)染色对其体外成熟、体外受精和孤雌激活早期胚胎发育的影响。结果显示:(1)BCB+组的成熟率(65.70％)要高于对照组(59.86％),且和控制对照组(58.42％)、BCB-组(48.86％)差异显著(P＜0.05);(2)BCB+组的体外受精囊胚发育率和对照组差异不显著,但都显著高于控制对照组(20.50％)和BCB-组(8.45％),且这两组间也差异显著(P＜0.05)。(3)BCB+组的孤雌囊胚率高于对照组、控制对照组,但差异不显著,BCB-组显著低于其它各组(P＜0.05)。以上结果表明:亮甲酚蓝染色可以筛选出发育完全的卵母细胞,在一定程度上能挑选出发育潜力较好的卵母细胞,但在卵母细胞的后续发育中却不能显著提高卵母细胞的体外生产效率。因此,应用BCB染色挑选优质水牛卵母细胞的方法还需要进行进一步深入研究。　　 研究Ⅲ,探讨了水牛卵巢颗粒细胞体外培养方法,以期建立水牛卵巢颗粒细胞体外培养模型,并探讨促卵泡素(FSH)和胰岛素对卵巢颗粒细胞形态和凋亡的影响。结果显示:水牛颗粒细胞在体外生长良好,可传代并保持正常的二倍体核型,成功建立了水牛卵巢颗粒细胞的体外培养模型;培养液中添加15μL/mL的FSH和7.5μL/mL的胰岛素均能明显改善体外培养过程中卵巢颗粒细胞的形态和降低细胞发生凋亡的比率(P＜0.01)。　　 研究Ⅳ,研究了分割液成份、分割方法及分割胚的冷冻对水牛分割胚发育的影响。结果显示:(1)三种分割液体10％FCS+TCM液、PBS+0.2MS液和D-PBS+5％PVP的分割成功率、分割胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三者均无差异显著性(P＞0.05),但前两种液体略显优势。(2)徒手分割和显微切割在分割成功率、分割胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三者均无差异显著性(P＞0.05)。(3)鲜胚和冻胚相比,分割成功率(78.73％、76.43％)、囊胚细胞数(52.5、46.3)都较高,但差异不显著(P＞0.05);在囊胚发育率方面,鲜胚组(68.27％)显著高于冻胚组(52.58％)(P＜0.05)。结果表明:(1)三种分割液体都可作为水牛的胚胎分割液,以10％FCS+TCM199液分割效果较好,且操作更为简便。(2)徒手切割法同样适用于水牛体外胚的分割,且操作更为简便。(3)分割冷冻-解冻后的胚胎,半胚的发育能力显著低于鲜胚的半胚发育能力,胚胎冷冻对其有很大影响。