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目的研究小鼠心脏移植排斥反应中CD4~+CD25~+Treg细胞miRNA表达谱的变化,寻找调控Treg细胞免疫抑制功能的特异性miRNA,为有效抑制移植排斥反应提供解决方案。方法1.建立同种小鼠腹腔异位心脏移植模型。将实验动物随机分为2组,即同系移植组和异系移植组,每组15只。2.磁珠分选移植术后5天受体脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞,提取总RNA,进行miRNA芯片杂交,使用Agient G2505C Microarray Scanner进行图像扫描,筛选出异系心脏移植排斥反应中Treg细胞相对于同系移植组差异表达显著的miRNA,与异种心脏移植mi RNA表达谱进行交叉分析。3.选取芯片杂交结果中差异表达显著的mi RNA-146a及miRNA-451a进行相对定量分析,通过qRT-PCR方法对两组分选出的CD4~+CD25~+Treg细胞样本进行检测,验证芯片结果。4.通过microRNAorg,TargetScan和PITA软件对两组间差异表达显著的miRNA-146a和miRNA-451a进行相关靶基因预测,取三个数据库共同的基因,后续分析miRNA调控Treg细胞影响移植排斥反应的调控通路。结果1.模型训练阶段和成熟阶段手术的成功率分别为32.5%和92.5%,成熟阶段的手术成功率明显高于前者。2.磁珠分选小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞的纯度为89.3%。3.异系移植组与同系移植组芯片杂交结果显示移植术后受体小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞中有58个mi RNA表达显著升高,12个miRNA表达显著下降,共计70个mi RNA差异表达显著;与异种心脏移植供心miRNA表达谱进行交叉分析发现共有9个miRNA差异性表达一致。4.对差异表达显著的miRNA-146a与mi RNA-451a进行定量分析,结果显示异系移植组miRNA-146a的表达量比同系移植组升高3.480倍,异系移植组miRNA-451a的表达量比同系移植组降低2.618倍,而且miRNA变化幅度与芯片结果一致。5.通过miRNA靶基因预测软件预测出miRNA-146a与移植排斥反应相关的靶基因为TRAF6,IRAK1和STAT1,miRNA-451a与移植排斥反应相关的靶基因为LKB1和AKT1。结论1.表达谱分析结果表明同种异系心脏移植排斥反应中Treg细胞有多个miRNA差异表达显著,这些miRNA在细胞的分化、成熟以及细胞的凋亡等过程发挥了重要作用。2.同种异系心脏移植Treg细胞miRNA表达谱与异种心脏移植供心miRNA表达谱交叉分析显示共有9个miRNA差异性表达一致,说明这9个miRNA在移植排斥反应中发挥着重要的作用。3.同种异系小鼠心脏移植排斥反应中Treg细胞内miRNA-146a出现显著高表达,miRNA-451a出现显著低表达,说明它们参与了Treg细胞调控免疫应答及炎症反应的过程,进而在移植排斥反应中发挥作用。