论文部分内容阅读
目的：筛选甘草次酸类及甘草查尔酮类化合物抗癌活性较高的活性单体，考察甘草次酸类及甘草查尔酮类化合物对体外培养的正常肝细胞（Chang liver）及人肝癌细胞（Bel-7402）生长活力、凋亡作用及凋亡时间以及相关基因（p53、Bax、bcl-2）表达调控，揭示甘草次酸类及甘草查尔酮类对Bel-7402细胞的抗癌活性及促凋亡作用的机制。方法：本研究将正常肝细胞（Chang liver）和人肝癌细胞（Bel-7402）作为体外模型。利用MTT比色法筛选甘草中的三萜类和查尔酮类有效成分及其半合成衍生物的有效剂量，包括对正常肝细胞毒性及对肝癌细胞的抑制作用。进一步应用流式细胞仪技术考察药物对肝癌细胞（Bel-7402）的促凋亡作用和凋亡时周期情况。最后应用Western Blot蛋白质印迹法考察药物对相关基因（p53、Bax、bcl-2）的表达调控。结果：1.甘草黄酮类中，甘草总黄酮A、甘草总黄酮B及光甘草定对Chang liver细胞抑制作用不明显；在5-500μg/ml范围内，随着药物浓度的增加，三种提取物对Bel-7402细胞生长抑制率逐渐增加，且单体光甘草定的抑制作用最强。2.甘草次酸类化合物中，18α-甘草次酸(18α-GA)、18β-甘草次酸(18β-GA)、甘草次酸-5氟尿嘧啶复合物（GA-5FU）对正常肝细胞Chang liver、肝癌Bel-7402细胞均有抑制作用，但对chang liver细胞抑制作用不太明显。在5-320μmol/l范围内对肝癌Bel-7402细胞抑制率随浓度升高而逐渐升高，在80-160μmol/l浓度下，GA-5FU、5FU对Bel-7402细胞凋亡率分别是57%-59.1%、16.7%-20.1%。3.甘草查尔酮类化合物中，异甘草素（ILG）、3-甲氧基异甘草素（3-MO-ILG）、3-羟基异甘草素(3-0H-ILG)在5-320μmol/l范围内对Bel-7402细胞和Chang liver细胞抑制率随浓度升高而逐渐升高，其中ILG、3-MO-ILG对肝癌Bel-7402细胞抑制率最为明显（最高抑制率分别达63%及89%），采用流式细胞仪技术检测，在40-160μmol/l浓度下，促凋亡率分别为10.6%-79%及10.1%-93.7%。ILG和3-MO-ILG在IC50浓度时是通过阻滞G2/M期促进细胞凋亡。采用Western Blot法检测，发现3-MO-ILG促Bel-7402细胞凋亡是通过上调p53和Bax，下调bcl-2通路来完成。结论：1.甘草黄酮类中，甘草总黄酮A、甘草总黄酮B及光甘草定对正常肝细胞Chang liver毒性低，而对肝癌Bel-7402细胞表现出较强的抑制增殖的作用，其中单体光甘草定对Bel-7402细胞抑制率最明显。2.甘草次酸类化合物中，18α-GA、GA-5FU对Bel-7402表现出较好的抑制活性，对癌细胞促凋亡的同时，对正常肝细胞Chang liver无明显毒性作用。3.甘草查尔酮类化合物中，3-甲氧基异甘草素对肝癌Bel-7402细胞显示出显著的促凋亡作用，而对正常肝细胞Chang liver的抑制作用相对较小；异甘草素、3-甲氧基异甘草素通过阻滞G2/M期来促进癌细胞凋亡；3-甲氧基异甘草素通过上调p53和Bax，下调bcl-2相关线粒体通路来促进肝癌Bel-7402细胞凋亡。这可能是其抗肝癌活性及促进癌细胞凋亡作用的机制。