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目的:研究天麻地上茎活性成分提取分离纯化技术及生药质量标准,探讨天麻地上茎的开发利用价值,为应用研究奠定基础。
方法:1.实验材料采制:采于陕西勉县中药材新技术开发研究所示范园。收集苗期、花期、果期、成熟期的天麻地上茎,洗净,煮透,低温干燥。另一部分成熟期的天麻地上茎自然干燥。2.活性成分提取分离纯化技术研究:①天麻多糖的提取分离纯化技术研究:以天麻多糖含量为指标,采用正交试验设计研究天麻地上茎天麻多糖的提取工艺;以天麻多糖纯度为考察指标,研究天麻地上茎天麻多糖经过大孔吸附树脂后的纯化程度。用紫外分光光度法结合蒽酮一硫酸法测定天麻多糖的含量。②天麻素的提取分离纯化技术研究:以天麻素含量为考察指标,采用正交试验设计研究天麻地上茎天麻素的提取工艺;以天麻素纯度为考察指标,研究天麻地上茎天麻素经过大孔吸附树脂和硅胶后的纯化程度。用HPLC法测定天麻素的含量。色谱条件:Kromail ODS色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相;乙腈-0.05﹪磷酸溶液(2∶98),检测波长:220nm。3.通过显微鉴别、理化鉴别、天麻素含量测定、检查等初步确定天麻地上茎的质量标准。
结果:1.活性成分提取分离纯化技术研究:①天麻地上茎天麻多糖的最佳提取工艺为加12倍量水,100Hz超声提取1次,每次40min,提取液浓缩加95﹪乙醇使成60﹪乙醇沉淀。或加10倍量水,中等火力微波提取1次,每次10min,提取液浓缩加95﹪乙醇使成80﹪乙醇沉淀。经大孔吸附树脂(HPD100、DM-18、D-101)纯化后,天麻地上茎天麻多糖的纯度分别为:64.74﹪、 65.24﹪、 60.46﹪,与未经处理的提取液中天麻多糖纯度42.16﹪相比分别提高了22.58﹪、23.08﹪、18.3﹪,其中DM-18树脂纯化效果最好。葡萄糖含量在0.04mg~0.36mg范围内其含量与吸光度呈良好的线性关系,回归方程:A=0.003095×C+0.00125,R=0.9996,平均回收率为98.14﹪,RSD为1.19﹪。②天麻地上茎天麻素的最佳提取工艺为10倍量的70﹪乙醇回流提取3次,每次1h;经大孔吸附树脂(S-8、DM-18、DM-130、DM-7HP)和硅胶纯化后,天麻地上茎天麻素的纯度分别为:12.3649﹪、23.5786﹪、 18.3147﹪、14.6573﹪、14.9955﹪,与未经处理的提取液中天麻素纯度7.3462﹪相比分别提高了1.7倍、3.2倍、2.5倍、2.0倍、2.0倍,其中DM-18树脂纯化效果最好。天麻素在0.098~0.98μg范围内,线性关系良好,线性方程为Y=2942915X+49143.65,r=0.9997,平均回收率为99.70﹪,RSD为0.85﹪。③制定了天麻地上茎的质量标准。
结论:天麻地上茎含有多糖类成分;经大孔吸附树脂和硅胶纯化后,天麻地上茎天麻素和天麻多糖的纯度明显提高。天麻地上茎质量标准草案能作为控制天麻地上茎质量的标准依据。