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目的房颤的发生过程与心肌纤维化有着密切关系,其早期为电重构和离子通道特征发生改变,随着病程的进展,心脏胶原基质大量积聚,心肌细胞等结构发生变化,即发生了结构重构。心肌纤维化过程中,心肌成纤维细胞会受到一些信号因子的影响,近年来已发现miRNA广泛参与心血管系统的功能调控,其中,miRNA对心肌纤维化过程的调控及其对房颤的影响更是近年的研究重点。Micro RNA-369-5P是微小RNA的一种,研究表明micro RNA-369-5P可以介导DNA甲基化的发生,进而使PTCH1的表达发生变化,DNA甲基化已被证明参与了心房纤维化的发生发展。本课题将从micro RNA-369-5P着手,通过其表达变化对下游基因表达和蛋白的翻译产生影响,初步探讨micro RNA-369-5P对心房纤维化的可能作用机制。方法:随机将50只6周龄左右并且体重相近的雄性SD大鼠分为2组,分别标记为AAC组(行腹主动脉缩窄术造房颤心肌纤维化模型)30只、假手术组(行Sham术)20只,术后4周处死大鼠获取心脏标本。HE染色法和Masson染色法观察大鼠心脏标本的病理学变化并计算胶原容积分数(CVF)。提取SD乳鼠心肌纤维细胞(CFs)培养,用Lipofectamine?2000 Reagent试剂,在SD乳鼠心肌成纤维细胞中瞬时转染micro RNA-369-5p mimics和inhibitor及其阴性对照、DNMT3a的过表达质粒组(m DNMT3a-p EGFP-C3)、DNMT3a si RNA(小干扰RNA)组及阴性对照组,24~48h后处理细胞,采用q RT-PCR检测miR-369-5p的表达,以及DNMT3a、PTCH1、I型胶原(collagenⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的m RNA水平的表达,Western blot法测定α-SMA、ColⅠ、PTCH1以及DNMT3a蛋白的表达,CCK8法检测提取的心肌成纤维细胞增殖活性。结果同假手术组(行Sham术)相比较,心肌纤维化模型组中,HE和Masson染色结果显示心脏组织细胞间质的胶原纤维增生,胶原容积分数(CVF)增加,纤维化的模型成功;q RT-PCR结果显示模型组(AAC)中miR-369-5p的m RNA表达量明显下降,甲基转移酶3A(DNMT3a)的m RNA表达量明显增加;Western blot结果提示ColⅠ、α-SMA和DNMT3a蛋白表达量增加,PTCH1蛋白表达量降低。在体外细胞实验中,瞬时转染micro RNA-369-5p mimics和inhibitors及其阴性对照的原代CFs中,q RT-PCR提示在mimics组CFs中miR-369-5p和PTCH1的m RNA表达量上调,ColⅠ、α-SMA和DNMT3a的m RNA表达量降低;瞬时转染m DNMT3a-p EGFP-C3及其阴性对照和DNMT3a si RNA及其阴性对照的原代CFs中,q RT-PCR提示同DNMT3a si RNA组相比较,在m DNMT3a-p EGFP-C3组中ColⅠ、α-SMA和DNMT3a的m RNA表达量明显升高,PTCH1的m RNA表达量降低。Western blot结果提示在mimics组中ColⅠ、α-SMA和DNMT3a的蛋白表达降低,PTCH1的蛋白表达增加;m DNMT3a-p EGFP-C3组中ColⅠ、α-SMA和DNMT3a的蛋白表达增加,PTCH1的蛋白表达降低。CCK8实验结果显示在m DNMT3a-p EGFP-C3和inhibitors组中,细胞的增殖活性明显增强。结论AAC术的心肌纤维化模型中,miR-369-5p表达量下降,ColⅠ、α-SMA和DNMT3a表达量增加,PTCH1的表达量降低。细胞实验中,miR-369-5p的高表达可以抑制ColⅠ、α-SMA和DNMT3a表达,而DNMT3a的表达减少又可使PTCH1的表达上调。这些结果表明miR-369-5p mimics可以对心肌纤维化发生发展起抑制作用,并且与抑制甲基化的相关基因表达有关,PTCH1可能是其潜在作用的靶点。