新生儿ABO溶血病患儿血中胆红素对单核细胞TLR4、NF-κB蛋白和IL-12表达的影响

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目的:探讨新生儿ABO溶血病患儿血中不同浓度的胆红素对单核细胞 TLR4、 NF-κB蛋白和 IL-12表达的影响。方法:选择在2015年9月1日至2016年2月29日期间入住四川省人民医院本部及城东病区、龙泉驿区妇幼保健院的新生儿,包括新生儿 ABO血型不合溶血症、新生儿暂时性呼吸增快(湿肺)、新生儿低血糖症、新生儿低钙血症、新生儿咽下综合征作为研究对象。所有对象需符合下列标准:胎龄37~42周、出生体重2500~4000 g、Apgar评分正常、羊水清。研究对象根据是否发生溶血分为溶血组和非溶血对照组,溶血组按胆红素的浓度分为轻度溶血组(TBIL<220.6μmol/L)、中度溶血组(TBIL为220.6~307.8μmol/L)和重度溶血组(TBIL≥307.8μmol/L)。患儿入院时经股静脉穿刺取静脉血2ml,用于提取单个核细胞。采用流式细胞技术区分单个核细胞中淋巴细胞群和单核细胞群,并检测单核细胞群中溶血组和非溶血对照组 TLR4、 NF-κB蛋白和 IL-12表达情况。溶血组经丙种球蛋白治疗后取静脉血2ml提取单个核细胞,采用流式细胞技术区分淋巴细胞群和单核细胞群,并检测单核细胞群中 TLR4、 NF-κB蛋白和 IL-12的表达情况。结果:1.根据纳入、排除及中止标准,74例合格病例被纳入研究。溶血组中,轻度溶血组纳入病例数为4例,病例数太少,未进行统计学分析。溶血组和非溶血对照组病例在性别构成、胎龄、分娩方式、出生体重、日龄等方面差异无统计学意义,两组患儿具有可比性。2.比较各组间单核细胞表面分子TLR4的表达,中度溶血组和重度溶血组比非溶血对照组表达低(P<0.01),且重度溶血组比中度溶血组表达低(P<0.01),轻度溶血组纳入的4例所测单核细胞 TLR4表达的绝对值接近非溶血对照组均数。3.比较各组间单核细胞NF-κB蛋白的表达,溶血组比非溶血对照组表达低( P<0.01),溶血组中重度溶血组比中度溶血组表达低( P<0.01),轻度溶血组纳入的4例所测单核细胞NF-κB蛋白表达的绝对值接近非溶血对照组均数。4.比较各组间单核细胞细胞因子 IL-12的表达,中度溶血组和重度溶血组比非溶血对照组表达低( P<0.01),且重度溶血组比中度溶血组表达低(P<0.01),轻度溶血组纳入的4例所测单核细胞 IL-12表达的绝对值接近非溶血对照组均数。5.TLR4、NF-κB及 IL-12表达水平与胆红素浓度的相关性分析:(1)单核细胞 TLR4蛋白的表达与血浆胆红素浓度呈负相关(r=-0.6426,P<0.01)。(2)单核细胞 NF-κB蛋白的表达与血浆胆红素浓度呈负相关(r=-0.5366,P<0.01)。(3)单核细胞细胞因子 IL-12与血浆胆红素浓度呈负相关(r=-0.3859,P<0.01)。6.TLR4、NF-κB及 IL-12表达水平的相关性分析:(1)单核细胞 TLR4蛋白的表达与单核细胞 NF-κB蛋白的表达呈正相关(r=0.3994,P<0.01)。(2)单核细胞表面分子 TLR4与单核细胞细胞因子 IL-12两者无相关关系存在(r=0.1916,P>0.05)。(3)单核细胞 NF-κB蛋白与单核细胞细胞因子 IL-12两者无相关关系存在(r=0.2116,P>0.05)。7.溶血组丙球治疗前后单核细胞 TLR4、NF-κB及 IL-12表达情况比较:(1)比较溶血组丙球治疗前后单核细胞 TLR4的表达,丙球治疗后比丙球治疗前表达高(P<0.01)。(2)比较溶血组丙球治疗前后单核细胞 NF-κB的表达,丙球治疗后比丙球治疗前表达高(P<0.01)。(3)比较溶血组丙球治疗前后单核细胞 IL-12的表达,丙球治疗后比丙球治疗前表达高(P<0.01)。结论:1.新生儿ABO溶血病患儿血中,中、高浓度胆红素可下调单核细胞表面分子TLR4的表达,这种下调作用呈浓度依赖性,血浆胆红素浓度越高,下调作用越强,单核细胞TLR4的表达越低。2.新生儿 ABO溶血病患儿血中,中、高浓度胆红素可下调单核细胞NF-κB蛋白的表达,这种下调作用呈浓度依赖性,胆红素浓度越高,下调作用越强,单核细胞NF-κB蛋白的表达越低。3.新生儿 ABO溶血病患儿血中,中、高浓度胆红素可下调单核细胞细胞因子 IL-12的分泌,这种下调作用呈浓度依赖性,胆红素浓度越高,下调作用越强,单核细胞 IL-12的表达越低。4.丙种球蛋白可恢复新生儿 ABO溶血病血中单核细胞免疫功能。提示胆红素对新生儿免疫细胞的影响可能与调控 TLRs信号通路中 TLR4、NF-κB及 IL-12的表达有关,丙种球蛋白可恢复新生儿受损的免疫细胞功能。
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