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第一章EGCG抗肺癌A549细胞活性的研究目的：研究EGCG对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用；方法：1.常规培养A549细胞,EGCG处理A549细胞；2.MTT法测细胞的生长抑制率,形态学观察细胞形态变化,双染法流式细胞仪测细胞凋亡；3.建立A549细胞裸鼠移植瘤模型,分别用生理盐水、EGCG、顺铂处理；4.定期测量并记录肿瘤的体积,裸鼠的体重。结果：1.随着EGCG处理浓度的增加及处理时间的延长细胞的存活率下降,凋亡率增强,细胞体积变小、变圆,胞质浓缩,核固缩,有凋亡小体出现。2.生理盐水中,移植瘤随着时间的延长,肿瘤体积明显增大,而接受EGCG或顺铂处理的裸鼠,其移植瘤的生长受抑制,抑制率分别为37%和50%,同时EGCG组裸鼠体重较顺铂组重,毒副作用小。结论：1.EGCG作用于人肺腺癌A549细胞株,有抑制增殖诱导凋亡的作用,呈浓度及时间依赖性。2.EGCG对人肺腺癌A549细胞移植瘤的生长有抑制作用,且对裸鼠无明显的毒副作用。第二章EGCG通过线粒体凋亡途径诱导肺癌A549细胞凋亡目的：探讨EGCG是否通过调节Bcl-2家族成员诱导A549细胞凋亡。方法：1.分别用Western blot法、RT-PCR法及real-time PCR测Bax、 Bcl-xl及Caspase-3(17KDa)的蛋白及mRNA的表达；结果：1.体外实验中,随着EGCG处理浓度的增加及时间的延长,Bax的mRNA及蛋白的表达量增强,相反Bcl-xl的表达下降,而Caspase-3(17KDa)的蛋白表达则增强；2.体内实验中,较生理盐水组相比,EGCG组肿瘤组织中Bax的mRNA及蛋白的表达量增强,相反Bcl-xl的表达下降,而Caspase-3的蛋白表达则增强；均介于生理盐水组和顺铂组之间；结论：EGCG可以上调A549细胞Bax的表达,下调Bcl-xl的表达,同时上调Caspase-3(17KDa)的表达,并呈时间和浓度依赖性。第三章EGCG通过Ku70调控肺癌细胞A549的凋亡目的：探讨EGCG是否通过下调Ku70的表达诱导A549细胞凋亡。方法：1.分别用Western blot法、RT-PCR法及real-time PCR检测Ku70的蛋白及mRNA的表达；2.免疫共沉淀法检测Bax-Ku70之间的相互作用；3.为研究Ku70在EGCG促进A549细胞的凋亡作用中的影响,将PSliencer4.1-CMV-Ku70-shRNA转染入A549细胞,抑制Ku70的表达,后用EGCG处理细胞,再用Western blot测蛋白的表达,双染法流式细胞仪测凋亡率。结果：1.体外实验中,随着EGCG处理浓度的增加及时间的延长,Ku70mRNA及蛋白的表达量下降,Bax-Ku70之间的相互作用减弱；2.在体内实验中,较生理盐水组相比,EGCG组肿瘤组织中Ku70的mRNA及蛋白的表达量低,Bax-Ku70之间的相互作用强；3.Ku70被抑制后,EGCG对A549细胞的促凋亡作用增强,但对Bax表达无明显影响。结论：1.Ku70干扰质粒构建成功；2.EGCG可以下调Ku70的表达,减弱Bax-Ku70之间的相互作用。3.Ku70表达的抑制可以增强EGCG对A549细胞的凋亡诱导作用。第四章EGCG通过调控Ku70的乙酰化状态诱导肺癌细胞A549的凋亡目的：探讨EGCG是否通过调控Ku70的乙酰化状态诱导A549细胞凋亡。方法：1.免疫共沉淀法检测Ku70乙酰化状态；2.为研究Ku70乙酰化状态在EGCG促进A549细胞的凋亡中的作用,将pCDNA3.1(+)-Ku70转染入A549细胞,使其过表达Ku70,再用点突变PCR克隆出pCDNA3.1(+)-Ku70539/542R,并转染入细胞,使K539和K542两个位点的赖氨酸失去被乙酰化的功能,后用EGCG处理细胞,再用Western blot测蛋白的表达,双染法流式细胞仪测凋亡率,免疫共沉淀测Bax-Ku70之间的相互作用。结果：1.体外实验中,随着EGCG处理浓度及处理时间的增加,Ku70乙酰化增强；2.在体内实验中,与生理盐水组相比,EGCG组肿瘤组织中Ku70乙酰化增强；3.Ku70点突变后,EGCG对A549细胞的促凋亡作用减弱,但对Bax表达无明显影响,而Bax-Ku70之间的相互作用增强。结论：1.Ku70过表达质粒和Ku70539/542R点突变质粒构建成功；2.EGCG可以增强人肺腺癌A549细胞Ku70的乙酰化；3.Ku70.去乙酰化可以减弱EGCG对A549细胞的凋亡诱导作用。图45幅,表1个,参考文献109篇。