论文部分内容阅读
背景与目的:卵巢癌（ovarian carcinoma）是女性生殖道恶性肿瘤中致死率最高的肿瘤。由于卵巢癌的特性,患者预后往往较差、复发率较高,是威胁女性生命健康的严重问题。现有研究证实,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian Target of Rapamycin,mTOR）在卵巢癌组织中高表达。mTOR异常活化在恶性肿瘤发生、发展中发挥重要作用,mTOR具有抗凋亡、促进癌细胞生长的作用。而腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated kinase,AMPK）可以通过直接磷酸化结节性硬化症2（Tuberous Sclerosis Complex 2,TSC2）苏氨酸上1345位点激活TSC2,形成TSC1/TSC2复合物,从而抑制mTOR活性。有研究表明,水杨酸可以直接活化AMPK/TSC2,进而下调mTOR的表达与活化,最终抑制癌细胞的生长。因此,我们设想水杨酸对人卵巢癌细胞具有生长抑制作用。本实验通过研究水杨酸对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用及对AMPK、TSC2和mTOR蛋白表达和活化的影响,旨在探讨水杨酸是否可以活化人卵巢癌AMPK/TSC2下调mTOR的促生长作用,以期为卵巢癌的药物治疗提供新的思考方向。方法:1、结晶紫法筛选水杨酸的浓度区间,测定水杨酸诱导人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞72小时后细胞的存活率;2、结晶紫法测定顺铂和紫杉醇对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用。并比较水杨酸分别联合顺铂/紫杉醇与单用顺铂/紫杉醇对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用;3、Western Blot测定经水杨酸(IC20/IC50值)、顺铂(IC20/IC50值)和水杨酸联合顺铂(SA-IC20+DDP-IC50)分别作用人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞24小时后AMPK、TSC2和mTOR的表达和活化水平。结果:1、水杨酸以剂量依赖方式抑制人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长。水杨酸作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后的IC50分别为:3.870±0.270 mmol/L和3.030±0.240 mmol/L。2、顺铂和紫杉醇作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后的IC50分别为:6.980±0.538μmol/L和6.18±0.440μmol/L,0.018±0.001μmol/L和0.023±0.002μmol/L。水杨酸(IC20)分别联合不同浓度紫杉醇和顺铂作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后,顺铂和紫杉醇的IC50分别为:3.180±0.190μmol/L和2.690±0.160μmol/L,0.008±0.001μmol/L和0.010±0.001μmol/L,剂量增强因子（Dose Enhance Factor,DEF）分别为:0.44和0.43,0.46和0.44。结果显示:与单用紫杉醇或顺铂相比,经水杨酸联合作用后细胞的生长抑制更加明显（P<0.05）,提示水杨酸可增加顺铂或紫杉醇的生长抑制作用。3、水杨酸可促使人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞中AMPKαThr172和TSC2Ser1387磷酸化水平升高,并显著下调p-m TOR Ser2448的表达（P<0.05）。结论:1、水杨酸可以协同增加顺铂或紫杉醇对人卵巢癌细胞的生长抑制作用。2、水杨酸可活化人卵巢癌细胞AMPK/TSC2下调mTOR的促生长作用,可能为改善临床卵巢癌化学治疗效果提供了一个新的方向。