传统疫苗主要包括减毒疫苗和灭活疫苗,可以长期有效地诱导免疫保护,但疫苗中病原体的不完全灭活或恢复致病性往往会引起安全性问题。非复制性疫苗,如灭活病毒及特异性重组或高度纯化的亚单位抗原,具有较低的免疫原性。疫苗中往往使用佐剂增强疫苗的免疫效果。佐剂有许多潜在的益处,包括减少疫苗接种的频率,降低疫苗的抗原剂量,改善免疫应答的质量以及促进交叉免疫。与非佐剂疫苗或安慰剂相比,佐剂如MF59和AS04等显著改善了疫苗抗原的功效。佐剂理论上应是安全、耐受性好并且与抗原兼容的,还应具有最佳的pH值、渗透压和内毒素含量,具有一定的稳定性。此外它也应易于大规模生产并且经济上可行。但是在维持抗原佐剂低副作用的同时建立所有这些参数是一个非常困难的过程。因此目前只有少量的佐剂被批准应用于临床研究中。在过去的几十年,传染病的疫苗抗原发现有了重大进展,这对新一代佐剂提出巨大且迫切的需求,要求新一代佐剂在具有可忽略的副作用的同时能够诱导针对特定疾病的适当类型的免疫应答。IL-10是免疫系统中重要的免疫抑制调控因子,使用IL-10反义寡聚核苷酸（ASO）,可以暂时抑制IL-10在体内的表达,下调免疫系统应答的阈值,提高对抗原的免疫强度。含有非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODNs）可以作用于Toll样受体9,能够对肿瘤抗原产生高效的Th1型免疫应答,它已作为预防或治疗性抗原的佐剂应用于临床实验中。聚乙烯亚胺（PEI）虽然可以通过线粒体途径介导细胞死亡,产生较高的细胞毒性,但也有研究表明它可以用来提高DNA疫苗的免疫原性,且免疫类型偏向于Th2型。在本研究中,首次使用这三种物质去构建一种新型免疫调节剂。凝胶阻滞实验显示PEI被鲑鱼精DNA完全吸附时PEI:DNA的比例为1:3（w/w）,L929细胞CCK-8毒性实验发现加入3倍或更多PEI质量的DNA能够中和PEI的毒性。以此为基础设计动物实验,与单独使用卵清白蛋白（OVA）相比,OVA联用PEI-寡聚核苷酸佐剂能够在小鼠体内诱导更高的IgG抗体滴度。有趣的是,当PEI的量逐渐被ASO替代时,诱导的IgG抗体滴度并无显著性变化。由于PEI-寡聚核苷酸复合佐剂系统4℃放置24 h后会出现沉淀,考虑到佐剂的质量控制和可重复性,我们优化佐剂配方比例,直接采用ASO和CpG-ODNs构建复合佐剂。在ASO/CpG-ODNs佐剂系统中,细胞免疫荧光显示RAW264.7细胞在无阳离子聚合物存在下也能够摄取ASO和CpG-ODNs。OT-Ⅱ小鼠（其TCR能特异性地识别OVA抗原决定簇氨基酸序列）脾脏细胞体外OVA和佐剂共刺激96 h后,采用ELISA测定上清细胞因子IFN-γ与IL-4的比例,采用Q-PCR测定胞内转录因子GATA3和T-bet的表达水平。结果显示随着CpG-ODNs的增加,Th1型细胞占比增加。与单独使用OVA相比,当ASO和CpG-ODNs各为5μg时,OVA特异性的IgG抗体滴度显著增加。随着CpG-ODNs的增加,IgG2a抗体滴度也相应增加,表明免疫反应Th1型偏向性增加。这表明我们构建了一个不仅可以增强免疫应答还可以通过调节组分比例来调节免疫反应偏向性的佐剂平台。这种佐剂系统的内毒素含量在可接受范围内,且注射部位的组织无显著的红肿、炎症状况出现,表明这种佐剂系统具有高度的使用安全性,为各种疾病疫苗的抗原佐剂配伍提供了一个潜在的研究思路。