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片形吸虫病(Fascioliasis)是由大片吸虫和肝片吸虫感染而引起的一种人兽共患寄生虫病。据估计,全球每年由于片形吸虫病造成的损失超过30亿美元。此外,片形吸虫病已经被世界卫生组织(WHO)列为被忽视的热带人类疾病之一,全球至少有240万人感染片形吸虫病,1.8亿人处于感染风险中。可见,片形吸虫病是影响世界公共卫生和畜牧业发展的重要问题。在前期的片形吸虫蛋白组学研究中发现,14-3-3家族相关蛋白(14-3-3e)和Ras家族相关蛋白(Rab-10)是大片吸虫的排泄分泌蛋白(FgESPs),且能够在体内与山羊的外周血单个核细胞(PBMCs)结合。经查阅文献发现,14-3-3家族相关蛋白涉及寄生虫的多种生物学过程,包括初级代谢、信号转导、细胞周期调控、蛋白质运输、转录和应激反应;Ras家族相关蛋白是多种信号转导途径的关键组成蛋白,在寄生虫的生长发育过程中起重要作用。然而,有关大片吸虫14-3-3e和Rab-10对山羊PBMCs功能的影响到目前为止还不清楚。因此,本论文对大片吸虫14-3-3e基因和Rab-10基因进行了克隆、表达和序列分析,探索了14-3-3e和Rab-10重组蛋白在体外对山羊PBMCs功能的影响。通过对大片吸虫14-3-3e基因和Rab-10基因的克隆、表达和序列分析,结果表明它们的大小分别为774 bp和618 bp,分别编码257个和205个氨基酸残基,相对分子量分别约为30 kDa和23 kDa;它们的序列分别与GenBank中肝片吸虫14-3-3蛋白基因和Ras家族相关蛋白基因的同源性分别为100%和99%;r14-3-3e重组蛋白为可溶性表达,而rRab-10重组蛋白为包涵体表达,且都具有较好的纯化效果;分别用人工感染大片吸虫的山羊血清进行Western-blot分析,结果表明这两种重组蛋白都具有良好的免疫原性。当两种不同浓度的重组蛋白分别与山羊PBMCs共孵育后,通过采用间接免疫荧光技术(IFA)分别观察它们与山羊PBMCs的结合情况,实验结果表明这两种重组蛋白都能与山羊的PBMCs结合;通过应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测山羊PBMCs IL-4、IL-10、TGF-β和IFN-γ的分泌情况,实验结果表明r14-3-3e显著抑制了山羊PBMCs IL-4和IFN-γ的分泌,显著促进了IL-10和TGF-β的分泌,而rRab-10显著促进了山羊PBMCs IL-4、IL-10、TGF-β和IFN-γ的分泌;通过采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测山羊PBMCs的增殖情况,发现这两种重组蛋白都能显著抑制山羊PBMCs的增殖;通过采用迁移小室研究山羊PBMCs的迁移情况,实验结果表明r14-3-3e显著抑制了山羊PBMCs的迁移,而rRab-10显著促进了山羊PBMCs的迁移;用总一氧化氮(NO)检测试剂盒检测山羊PBMCs的NO产生情况,发现这两种重组蛋白都能显著促进山羊PBMCs NO的产生;采用流式细胞仪检测山羊单核细胞的吞噬能力,发现r14-3-3e显著抑制了山羊单核细胞的吞噬能力,而rRab-10则显著促进了山羊单核细胞的吞噬能力。研究发现,14-3-3e和Rab-10是两种重要的大片吸虫排泄分泌蛋白,且能影响宿主的免疫反应。当它们与山羊PBMCs相互作用时,14-3-3e表现出明显的免疫抑制作用,而Rab-10表现出明显的免疫促进作用。本研究结果为进一步阐明大片吸虫感染后的免疫逃避、免疫干扰和免疫抑制的机制研究奠定了基础。