目的:构建L-蛋氨酸γ-裂解酶(Metase)基因的两种高效原核表达载体,建立最佳高效原核表达体系。使来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas Putida)的Metase在大肠杆菌中高效表达,为深入研究Metase抗肿瘤作用奠定基础。方法:在恶臭假单胞菌来源的Metase基因已经合成(pBSK-Metase)的基础上,通过分子克隆技术,使Metase基因分别与高效原核表达载体pBV220、pGEX-4T-1连接,形成重组表达质粒pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase。重组子转化感受态大肠杆菌DH5α,涂布于含氨苄抗性的琼脂平板上,挑选白色单克隆菌落。小量提取质粒,PCR鉴定、双酶切鉴定,阳性克隆送往测序。42℃热诱导pBV220-Metase表达,IPTG诱导pGEX-4T-1-Metase表达。优化表达条件。收集菌沉淀,超声波破碎,收集Metase酶液粗品,测定Metase活性,统计分析比较。结果:成功构建出Metase基因的两种高效原核表达体系pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase,且经测序证实其中的Metase基因序列都是正确的。重组表达质粒pBV220-Metase和pGEX-4T-1-Metase转化感受态大肠杆菌DH5α后经诱导表达,均能测出Metase活性。结论:恶臭假单胞菌来源的Metase基因在大肠杆菌中成功地获得高效表达。重组表达质粒pBV220-Metase具有比pGEX-4T-1-Metase更强的活性,可作为Metase的最佳高效原核表达体系。