观光木分子谱系地理学研究

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观光木(Tsoongiodendron odorum Chun)为木兰科(Magnoliaceae)植物,是我国古老的孑遗树种,被列为我国二级重点保护植物,对研究古代植物区系、古地理及古气候具有重要的科学价值。本学位论文对采集于南岭山地6个省(区)21个观光木天然种群161个个体,采用叶绿体DNA非编码区序列标记开展分子谱系地理学研究,旨在探讨观光木种群进化及其濒危机制,为科学制定观光木遗传资源保护方案提供种群遗传学背景。主要研究结果如下:(1) cpDNA-PCR反应体系优化采用单因素及正交试验设计,建立了观光木cpDNA-PCR最优反应体系(201μL):50 ng模板DNA、1×PCR buffer、引物各0.2μmol·L-12.0 mmol·L-1MgCl2、0.3 mmol L-1dNTP、1 U Taq DNA聚合酶。扩增反应程序:80℃预变性5 min;95℃变性1 mmin,退火1 min,72℃延伸1 min,共30个循环;最后72℃延伸7 min。(2) cpDNA-PCR反应引物筛选筛选出适合于观光木分子谱系地理学分析的cpDNA引物:psbJ-petA、 trnHGUG-psbA和3’rpsl6-5’trnK,确定了各对引物最适退火温度。(3)观光木种群分子谱系地理学分析cpDNA-PCR扩增产物的序列比对结果发现,3对叶绿体DNA非编码序列片段共检测出9种单倍型,其中,单倍型H1分布最为广泛。DNASP5.10软件分析显示,种群核苷酸多样性(π)为0.00043,单倍型多样性(Hd)为0.26196;种群内平均遗传多样性(HS)为0.15636,总的遗传多样性(HT)为0.40309,观光木cpDNA变异具有显著的谱系地理结构(NST=0.67280,GST=0.37275,NsT>GST)。分子方差分析(AMOVA)结果显示,种群间遗传变异为60.19%,种群内遗传变异为39.81%,种群间遗传分化明显(FsT=0.60190)。巢式支系法分析(NCA)揭示,9种单倍型组成4个I级支系:单倍型H6单独为支系I-1;单倍型H1、H2、H3、H4、H7和H8组成支系I-2;单倍型H9单独为支系1-3;单倍型H5单独为支系I-4。单倍型H1可能是较为古老的单倍型。基于Templeton检索表,观光木种群现有地理分布格局为连续范围扩张所致。I级支系I-2,由长距离的定植,过去片段化所致。
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