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骨肉瘤是一种起源于骨间叶组织的恶性肿瘤,占原发恶性骨肿瘤的30%,好发于10-25岁之间的青少年,且在肿瘤中的发病率占据第三位。因其恶性程度极高,早期极易发生肺转移,其中约有10-20%的病人在诊断时发现有肺部转移灶,预后极差,目前治疗手段以截肢为主要的治疗方式,随着靶向化疗药物在临床中的广泛使用,虽然骨肉瘤病人的生存率有所提高,但因为耐药率发生,导致了诊断后的平均生存时间不足5年。因此寻找干预骨肉瘤进展及耐药的干预靶点是全球骨肉瘤治疗所面临的重大挑战及需求。在骨肉瘤病理中,其不断进展的病理表现是:骨肉瘤细胞的不断增殖浸润,最终导致骨肉瘤细胞的转移。由此可见,骨肉瘤细胞的增殖浸润是导致其病理进展的重要事件。目前尚无有效手段阻止其进展。因此,解析骨肉瘤不断进展机制,寻求新的有效干预策略,对降低死亡率有重大的临床意义。然而,骨肉瘤增殖转移的分子机制尚不清楚。目前国内外的大量研究支持EGFR介导的增殖信号通路活化是导致骨肉瘤进展的危险因素,虽然针对EGFR化疗的靶向药物在临床工作中取得了一定的疗效,但发现部分患者很快发生耐药,导致了诊断后的平均生存时间不足5年。目前为止,骨肉瘤多药耐药(Multidrug resistance,MDR)现象的出现成为了目前治疗失败的主要原因,比如长春新碱(Vincristine,VCR)作为骨肉瘤化疗的常用药物,却因为容易发生多药耐药现象,而严重影响了患者治疗结果及预后,因此寻找治疗耐药性的靶点及逆转的研究也是骨肉瘤治疗的热点。随着基因组学研究的不断进展,通过对骨肉瘤突变基因的筛选,研究发现:SIX1基因突变可能是恶性肿瘤病理进展的核心因素。相关证据表明:SIX1基因突变与已知的致癌基因KRAS、EGFR、PIK3CA相关,并且对增殖浸润及耐药性也具有重要的相关性。由此我们推测,SIX1可能是促进肿瘤增殖转移、多药耐药发生的重要干预点!我们提出科学假设:在骨肉瘤病理进展过程中,是什么调控了多条增殖信号通路的活化、凋亡信号通路活化的抑制、多药耐药性的发生?是否能够找到控制它们活性的共同干预靶点?然而这些都是尚未解决的科学问题。为解决上述科学问题,利用免疫组化方法检测SIX1在骨肉瘤组织中的表达情况,根据染色评分,进一步观察临床资料的搜集整理深入探讨与临床病理的相关性。完成上述工作后,本课题利用βcDNA转染骨肉瘤细胞上调SIX1蛋白的表达及SIXlsiRNA小干扰技术下调SIX1蛋白的表达,观察SIX1蛋白对骨肉瘤细胞生存曲线的影响。在此创新性工作基础上,通过对骨肉瘤细胞中SIX1蛋白的过表达及低表达进一步解析骨肉瘤病理不断进展的分子机制,同时观察多药耐药的发生是否与骨肉瘤细胞增殖相关,进一步明确Sixd对骨肉瘤细胞发生多药耐药的作用,通过对为骨肉瘤的防治提供新的研究思路和干预策略。