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目的： 1.分析189株肺炎链球菌对各类抗生素的耐药状况及特点，指导临床合理使用抗菌药物，防止耐药菌株的传播。 2.分析肺炎链球菌的PBPs基因突变情况以及探讨肺炎链球菌β-内酰胺类抗生素最小抑菌浓度(MIC)与PBPs变异的关系，以明确本地区肺炎链球菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制，以便能够及时采取措施控制感染，阻止耐药菌株的传播。 方法： 1.收集2011年6月－2012年3月台州地区各家医院住院患者的呼吸道、血液、脑脊液、脓液和胸水标本中分离到的肺炎链球菌，采用K-B法对10种抗菌药物进行敏感性试验及E-test法检测4种β-内酰胺类抗生素的MIC值，比较儿童和成人、PNSP和PSSP、侵袭性和非侵袭性感染肺炎链球菌的药敏结果，分析本地区肺炎链球菌的耐药特点。 2.用PCR法检测肺炎链球菌青霉素耐药相关基因PBPs，并进行基因测序。共检测63株肺炎链球菌，其中青霉素敏感22株，中介8株，耐药33株。 结果： 1.189株肺炎链球菌的药敏结果显示，青霉素不敏感99株，不敏感率为52.4％，其中PRSP84株占44.5％，PISP15株占7.9％。189株肺炎链球菌对红霉素、阿奇霉素、克林霉素、四环素和复方新诺明的耐药率较高，分别为95.2％、90.5％、85.7％、79.4％和69.8％。对左旋氧氟沙星、氯霉素、头孢噻肟、头孢曲松的耐药率较低，分别为1.6％、4.8％、7.9％、19.0％，其中头孢噻肟中度敏感菌株较多，占23.8％。未检出耐万古霉素、利奈唑胺和莫西沙星菌株。 2.根据肺炎链球菌对青霉素的耐药性将其分为PSSP、PISP和PRSP三组，PISP和PRSP统称为PNSP。PNSP与PSSP两组菌药敏比较结果发现PNSP组对头孢噻肟和头孢曲松的耐药率明显高于PSSP组(P<0.05和P<0.01)，差异有统计学意义。PNSP组细菌对于大环类酯类、四环素和复方新诺明的耐药率比PSSP组高，但两组细菌比较差异无统计学意义(P>0.05)。 3.在儿童与成人肺炎链球菌分离株的药敏结果比较中，儿童分离株对β-内酰胺类抗生素的耐药性明显高于成人分离株，其对青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的敏感率分别为：22.9％、46.9％和57.1％；而成人分离株对β-内酰胺类抗生素的敏感率则相对较高，分别为78.6％、89.3％和100％。两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。两组细菌对大环类酯类、四环素和复方新诺明耐药性均较高，相比较无显著性差异(P>0.05)。喹诺酮类药物、氯霉素敏感性均很高。 4.在侵袭性和非侵袭性肺炎链球菌抗菌药物的活性比较中，两者的耐药性分析结果有很多相似之处，无明显差别。 5.在PBP1a基因突变中，48株在STMK盒内发生了Thr371→Ala/Ser替换，其中PRSP菌株均发生了此位点的氨基酸替换，同时伴有STMK保守序列后的387位Glu→Asp的突变。另外还发现了Ser351→Ala及Ile358→Thr的基因置换。有9株耐药株和2敏感株发生了172位氨基酸变异SSN→SSV。PBP2b基因检测中，SVVK(391-394)、SSN(448-450)、KTG(620-622)3个保守区内均未发生氨基酸替换，但所有耐药菌株和部分敏感菌株均发生了Thr451→Ala的替换，同时伴SSN基序附近位点Ser478→Thr的替换，此外还发现Leu460→Ile，Glu481→Gly的联合突变。13株SP在保守基序KTG区域后的出现Ala624→Gly突变，并同时合并PBP2b570QLQPT→AIDTK的置换。在PBP2X基因的突变中，大部分耐药菌株PBP2x基因STMK保守序列出现Thr338→Ala变异以及附近的氨基酸变异，如Leu364→Ile。从细菌的β-内酰胺类药物的MIC值可以发现，随着PBPs基因序列中的突变位点增多，菌株对β-内酰胺类抗菌药物的MIC值也逐渐升高(P<0.05)。 结论： 1.肺炎链球菌临床检出株对大环类酯类、四环素和复方新诺明的耐药性很强，对万古霉素、利奈唑胺、氯霉素和喹诺酮类抗生素最为敏感。青霉素不敏感的肺炎链球菌比例较高，在PNSP菌株中，多重耐药菌比例较高，β-内酰胺类抗生素的耐药趋势与青霉素的相似。肺炎链球菌儿童分离株的抗菌药物耐药率明显高于成人分离株。侵袭性菌株和非侵袭性菌株的耐药性无明显差别。 2.本地区肺炎链球菌的主要耐药(R)模式上，以红霉素+复方新诺明+四环素为主，其次则为红霉素+复方新诺明+四环素+克林霉素的耐药模式，红霉素+复方新诺明+四环素+克林霉素+青霉素(12.5％)比例也较高。 3.所有耐青霉素的肺炎链球菌均存在不同程度的基因突变，突变位点主要集中在保守基序SXXK、SXN、KT/SG及其临近氨基酸序列。肺炎链球菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制主要与PBP1a，PBP2b，PBP2x变异有关，PBP1a和PBP2x可能是在PBP2b变异的基础上进一步增加肺炎链球菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性。 随着肺炎链球菌株的PBP2x、PBP2b、PBP1a各位点的变异增多，菌株对β-内酰胺类抗菌药物的MIC值也逐渐升高。其中，PBP1a、PBP2b的变异主要导致青霉素和或头孢菌素类MIC值的变化，而PBP2x的突变主要与头孢菌素类MIC值的变化有关。PBP单一位点的变异无法导致对β-内酰胺类的耐药。