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目的:观察 Miro-1蛋白在宫颈癌组织中的表达情况,并在顺铂诱导宫颈癌细胞株-HeLa细胞的凋亡时,探讨 Miro-1蛋白如何影响顺铂的生理学效应。最终提供某些宫颈癌患者产生顺铂化疗药物的耐药性科学理论依据,并判断Miro-1是否可成为顺铂治疗宫颈癌患者的新的生物学指标。 方法:利用 PCR扩增得到目的基因,载入到载体质粒中,通过细胞免疫组化及共聚焦显微镜确定内源性 Miro-1蛋白及过表达时,在细胞内亚细胞器的定位。其次,通过流式细胞仪观察宫颈癌细胞株-HeLa细胞的死亡率及死亡的类型。利用蛋白印迹法确定PARP蛋白的切断率,最终判断过表达Miro-1蛋白可否增加顺铂诱导的HeLa细胞的凋亡率。最后利用流式细胞仪检测线粒体膜通透性,并利用细胞免疫组化染色AIF蛋白,确定Miro-1蛋白如何增加细胞凋亡的机制。 结果:(1)亚细胞器定位实验:通过细胞免疫组化实验,观察到内源性Miro-1蛋白位于线粒体。同时利用 pEGFP-N1-Miro-1质粒与 pDsRed-Mito质粒共转染于HeLa细胞,当过表达Miro-1蛋白,同样可存在于线粒体内。(2)通过流式细胞仪观察细胞死亡率,发现随着Miro-1蛋白表达,可增加顺铂诱导HeLa细胞的死亡率,提示 MiRo-1蛋白表达与细胞死亡呈正比,过表达 Miro-1蛋白24h及48h时,其细胞死亡率分别为24.2%和36.8%。(3)利用PI及Annexin V双重染色法染色 HeLa细胞,并通过流式细胞仪检测确定细胞死亡类型,发现 Miro-1蛋白可引起细胞凋亡。(4)利用流式细胞仪检测线粒体膜通透性,发现当过表达Miro-1蛋白可增加线粒体膜的通透性,提示Miro-1蛋白可改变线粒体膜的完整性。(5)在HeLa细胞内过表达Miro-1后,利用顺铂诱导HeLa细胞凋亡,并进行AIF免疫染色,发现过表达Miro-1可增加AIF蛋白由线粒体溢出至细胞核,增加HeLa细胞的凋亡。 结论:在宫颈癌组织中 Miro-1蛋白表达水平下降,在宫颈癌细胞株-HeLa细胞中过表达Miro-1蛋白,可增强线粒体膜的通透性,从而增加顺铂诱导的HeLa细胞凋亡。