基于纳米复合材料固定大肠杆菌的电化学传感器在抗生素有效性检测领域中的应用

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目的随着医药、保健事业的不断发展,药品质量及安全检测问题越来越受到人们的关注。传统的抗生素类药品检测方法操作复杂、成本高、选择性低,应用起来难免局限。因此,为了弥补传统药物检测技术的缺陷,研发一种高能低耗,相对简单快速,适应现代医药事业发展的新检测方法势在必行。固定化微生物的稳定性好,易于保存,使用方便,且相对于其它生物受体更加价廉易得等优点,因此在药品质量控制和水质快速检测领域均有应用。本研究通过氧化石墨棒(GR),生成表面氧化石墨烯(GO)结构并用于固定大肠杆菌(E.coli),再采用聚乙烯醇(PVA)混合市售GO制备胶体进行包埋得到GO/PVA/E.coli/GO/GR颗粒;此外,海藻酸钠(SA)和MIL-53(Fe)掺杂到聚乙烯醇(PVA)胶体中形成复合胶体,并与硼酸交联得到MIL-53(Fe)/E.coli/SA/PVA颗粒,通过结合电化学技术,建立一种可灵敏、快捷地检测抗生素类药物有效性的新方法。方法以质控菌株E.coli作为受试微生物,K3[Fe(CN)6]3-为媒介体负责转运微生物呼吸作用产生的电子至电极表面,通过监测还原产物([Fe(CN)6]4-)的量的变化,从而得到微生物活性变化的信息,进而衡量药物的有效性。本研究通过筛选GO/PVA/E.coli/GO/GR颗粒和MIL-53(Fe)/E.coli/SA/PVA颗粒的最佳形成条件制备了灵敏的生物探针,搭建了基于固定化微生物的传感体系,并应用于不同抗生素类药物的检测。结果GO/PVA/E.coli/GO/GR颗粒:筛选出氧化石墨烯固定化大肠杆菌的最佳时间为16h;在包埋材料的选择上,固定PVA的用量为10g/L时,获得GO的最佳含量为0.5g/L;通过考察硼酸对固定化E.coli活性的影响,获得最佳交联时间为1min;比较不同存储条件下,固定化E.coli的活性随存储时间的变化规律,确定4℃冰箱干燥条件更适合复合材料包埋固定E.coli颗粒的保存;在药物活性检测中,庆大霉素、阿米卡星、阿莫西林、头孢吡肟对其抑制率达到50%时的药物浓度分别为8.01mg/L、6.51mg/L、9.93mg/L、4.07mg/L,万古霉素药物浓度为16.0mg/L时抑制率达到最高点32%。MIL-53(Fe)/E.coli/SA/PVA颗粒:筛选出胶体掺杂材料MIL-53(Fe)的最佳浓度为0.05g/L;通过对胶体交联时间的筛查,可确定最佳交联时间为1h,在4℃干燥条件下储存;在毒性检测中,DCP对MIL-53(Fe)/E.coli/SA/PVA抑制率达到50%的浓度为27.67mg/L,在抗生素药物检测中,庆大霉素、阿米卡星对其抑制率达到50%的药物浓度分别为:14.12mg/L和16.01mg/L。结论本文通过研究两种固定化微生物颗粒的最佳形成条件,搭建了更为灵敏、便捷的微生物传感器,并将其应用于标准毒物DCP的毒性检测以及抗生素药物的有效性检测中。结果表明,掺杂纳米材料的固定化微生物颗粒具有更高的活性,对毒物DCP以及抗生素的检测具有较好的响应;固定化微生物可进行长期存储,做到随用随取;基于固定化微生物的电化学传感器相对于传统检测方法更为省时、便捷。总之,本研究所提出的电化学微生物传感器灵敏、便捷、省时,在抗生素有效性检测领域中具有一定的应用潜力。
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