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幽门螺杆菌(Helicobacterpylri，Hp)是引起人急、慢胃炎、消化道溃疡、胃癌和反流性食道炎的病原体，其与人冠心病、过敏性紫癜等疾病密切相关。Hp能在人胃酸性环境定植，主要是因该细菌有尿素酶和尿素膜通道蛋白(UreI)。Weeks等2001年研究指出Hp的ureI的基因是Hp在胃酸性环境定植和生存的关键基因，推测其为抗Hp感染的新药物靶点，但目前没有实验证明。本研究用分子克隆方法获得Hp的ureI基因和其原核表达载体，再诱导得到重组UreI蛋白，并研究其免疫原性和免疫反应性。在ureI的5’端引入霍乱毒素B亚单位(CtB)基因，获得CtB与UreI融合的重组蛋白和真核表达载体。用Hp感染的小鼠模型评价该真核载体作为治疗性DNA疫苗的效果，探讨Hp的ureI作为新药靶点的可能性，同时寻找有希望的治疗性疫苗。为达到此目的，本研究分五部分完成： 第一部分 Hp尿素膜通道蛋白(UreI)的基因克隆、原核表达和免疫特性分析 首先克隆得到幽门螺杆菌尿素膜通道的全长基因ureI，构建原核重组质粒pET32a(+)-ureI和其原核表达工程菌株，并在特定的条件下用IPTG诱导工程菌表达了分子量分为43kD带His标签的重组蛋白rUreI，经免疫印迹证明该重组蛋白的免疫反应性。 第二部分 ctB与ureI双基因融合的原核表达、蛋白纯化和免疫特性分析 克隆了霍乱弧菌B亚单位基因(Cholera Toxin B，ctB)，并引入ureI基因的5’端，构建原核重组质粒pET32a(+)-ctB／ureI和其原核表达工程菌株，并在特定的条件下经IPTG诱导工程菌表达了分子量为58kD带