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目的近年来细胞遗传学、分子生物学及治疗靶点识别技术的发展，推动了靶向治疗及分层治疗水平的进步，明显提高了急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)临床疗效及总体生存率。目前细胞遗传学和分子基因检测已成为AML临床分型的主要依据。美国国立癌症综合网(NCCN)和中国AML(非APL)诊疗指南均依据细胞遗传学和分子生物学指标对AML进行危险度分级，分为预后良好，预后中等和预后不良组。但许多预后良好的患者与临床治疗反应不相符，出现治疗效果差，难缓解，缓解后易复发等情况。提示除已有的细胞遗传学、分子生物学检测指标及可能的检测误差等因素外，尚有许多更复杂的白血病预后因素尚未阐明。因此需要探索更全面、更准确的反映白血病患者预后的检测指标及方法。蛋白芯片(protein microarray，或protein chips)是高通量、高灵敏度、易于操作、实用性高的蛋白质研究工具。我们本课题选用RayBiotech可一次性检测507种人类蛋白表达水平的生物素标记抗体芯片，检测目标蛋白包括血管生成因子、炎症因子、生长因子、细胞因子、细胞粘附分子、可溶性受体、趋化因子和其他蛋白等。该芯片在鉴定关键发病因素、筛选生物标志物和药物靶标等方面已显示了较为广泛的应用价值。故我们应用该芯片对具有不同细胞遗传学和分子生物学标志的AML患者血清标本进行了检测，期望筛选出临床判断AML预后价值的分子标志物，为后续制备用于临床预测AML患者预后和指导个体化治疗的蛋白芯片奠定基础。方法1、收集从2011年08月至2013年01月在我科就诊的AML初诊患者(非APL)113例，根据细胞遗传学标志、基因检测和临床治疗效果进行分析，将其分为预后良好、预后中等和预后不良组。2、蛋白芯片筛选AML血清标志物：应用可一次性检测507种人类蛋白表达水平的生物素标记抗体芯片，对11例初诊AML和5例健康对照组的血清标本进行检测。3、检测AML血清中OPN的含量：应用ELISA法对18例AML(9例预后良好组，9例预后不良组)和9例健康对照组的血清进行检测。4、采用AAH-BLM-1的数据分析软件对检测结果进行数据预分析，数据以x±S表示，并进行t检验。结果1、根据初诊AML患者的年龄、初诊时白细胞总数(WBC)、细胞遗传学和分子生物学标志以及临床治疗反应将接受了治疗的71例患者进行分组，预后良好组10例，预后中等组27例，预后不良组34例。从预后良好组和预后不良组中筛选出11例AML患者为后续试验做准备。2、11例AML与5例正常对照组比较，22个标志因子在AML中高表达(P＜0.05)。包括生长因子：MFG-E8、Osteoactivin、Hepassocin、M-CSF、M-CSF R、Insulin R；白介素家族：IL-20、IL-3、IL-1F8/FIL1eta、IL-2R alpha、IL-2R beta/CD122、IL-1R6/IL-1Rrp2；凋亡因子：Fas/CD95；粘附分子：ICAM-3/CD50；趋化因子：6Ckine/CCL21；脂质运载蛋白：Lipocalin-1；新型跨膜蛋白：TMEFF1/Tomoregulin-1；基质金属蛋白酶家族成员：MMP-3；转化生长因子超家族成员：GFR alpha-4；肿瘤坏死因子受体超家族：TNF-alpha、GITR/TNFRF18、DR6/TNFRSF21。3、6例预后不良组和5例预后良好组AML比较，11个标志因子在预后不良组中高表达(P<0.05)。包括生长因子：VEGF-D、IGFBP1；基质金属蛋白酶抑制剂：TIMP-2；内源性血管生成抑制剂：ES；蛋白水解酶：UPA；趋化因子：MIP-2、FGF-19；结合蛋白：LBP；黏附分子：L-selectin/CD62L；载脂蛋白：SAA；白介素17受体：IL-17RD。4、ELISA法检测AML和健康对照组血清标本，结果显示AML预后不良组(FLT3/ITD阳性)血清OPN含量明显高于预后良好组(AML1/ETO、NPM1阳性)和健康对照组(P<0.05)。AML预后良好组(AML1/ETO、NPM1阳性)血清OPN含量明显高于健康对照组(P<0.05)。结论1、AML的预后和危险度分层与患者发病年龄、初诊时WBC、细胞类型、细胞遗传学和分子遗传学标志以及临床治疗效果等均密切相关。2、蛋白芯片检测发现在AML细胞中有22个标志因子高表达，对AML细胞凋亡、增殖、分化及浸润起到了重要作用，并与AML的发生、发展密切相关。3、与预后良好组比较，11个标志因子在AML预后不良组中高表达，其参与了AML的髓外浸润、凝血和纤溶系统的调节、造血干细胞移植后的造血重建等过程。可作为构建AML预后判断的新指标体系的依据，为预测AML预后、指导临床个体化治疗提供新的手段和方法。4、伴有FLT3/ITD阳性的预后不良AML患者OPN表达明显高于预后良好组，证实OPN在AML中是一个预后不良因素。也进一步验证了AML血清标本的稳定性和所做蛋白芯片检测的可靠性。