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目的：观察白藜芦醇(Res)对TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖及凋亡的影响,以及其对促凋亡因子Bcl-x1／Bcl-2相关死亡启动子(BAD)的作用,探讨Res对TNF-α诱导的RAFLS作用机制。方法：滑膜组织取自行膝关节置换术的活动性类风湿关节炎患者6例,分离出成纤维样滑膜细胞进行原代培养及鉴定。不同浓度的Res干预RA FLS后再用TNF-α(10ng.ml-1)刺激24h。MTT比色法测定Res对TNF-α诱导RA FLS生长的抑制作用。流式细胞仪检测法Res对RA FLS细胞周期及凋亡率的影响。Western-blot方法分析Res对TNF-α诱导RA FLS中磷酸化BAD蛋白表达的影响。结果：低浓度(12.5μM、25μM) Res对TNF-α诱导RA FLS增殖无明显的抑制作用,当Res浓度为50-200μM时,对TNF-α诱导RA FLS增殖具有明显抑制作用(P＜0.05),并呈时间和剂量依赖性。低浓度(12.5μM、25μM)Res对TNF-α诱导RA FLS细胞周期无影响,50-200μMRes对RA FLS细胞周期的影响表现为DNA合成前期的细胞(G1期)比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例减少,DNA合成后期和分裂期(G2／M期)细胞比例亦减少。随着Res浓度增大,RA FLS增殖指数逐渐降低,并呈剂量依赖性。低浓度Res (12.5、25μM)组凋亡细胞百分比分别为(1.95±0.62)%、(2.37±0.76)%,与TNF-α组((1.52±0.73)%)比较,差异均没有统计学意义(P>0.05)；较高浓度Res(50、100、200μM)组凋亡细胞百分比分别为(5.92±1.23)%、(9.06±1.78)%、(12.26±3.01)%,随着Res浓度增高,凋亡细胞数增加,与TNF-a组比较,有显著性差异(P＜0.05)。TNF-α刺激RA FLS后,磷酸化BAD表达明显增加,当用不同浓度的Res干预后,磷酸化BAD表达减少,呈剂量依赖关系。结论：50-200μM Res通过阻滞RA FLS细胞周期,降低BAD磷酸化水平发挥抑制TNF-α诱导RA FLS增殖,促凋亡作用,Res具有治疗RA的潜在价值。目的：观察Res对TNF-α诱导的RAFLS主要炎性细胞因子IL-1β、MMP3产生的影响,从炎性细胞因子的角度来探讨Res的抗炎作用。方法：ELISA法检测各组细胞上清液中IL-1β、MMP-3的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TNF-α诱导的FLS中IL-1β、MMP-3的mRNA表达,Western-blot方法分析Res对TNF-α诱导RA FLS中IL-1β、MMP-3蛋白表达的影响。结果：在TNF-α刺激24h后,RA FLS上清液IL-1β、MMP-3的含量急剧升高,分别为(436.235±79.721)pg.ml-1, (89.950±14.458)ng.ml-1,与空白组比较,有显著性差异(P<0.01)。Res抑制TNF-α诱导RA FLS分泌IL-1β、MMP-3,呈剂量依赖性。Res在浓度为12.5μM时即可抑制TNF-α诱导RA FLS的IL-1β、MMP-3mRNA的表达水平,至100、200μM时抑制作用达到最高峰。Western-blot方法分析显示Res呈剂量依赖关系降低TNF-α诱导RA FLS中IL-1β、MMP-3的蛋白表达。结论：Res在mRNA和蛋白质水平抑制TNF-α诱导的RA FLS的IL-1β、MMP-3分泌,Res通过抑制细胞因子的产生发挥抗炎作用。目的：观察PI3K/Akt信号通路在TNF-α诱导RA FLS增殖及炎性因子产生中的作用,以及Res对TNF-α诱导RA FLS的PI3K/Akt信号通路影响,探讨Res对TNF-α诱导RA FLS发挥抗增殖及抗炎作用的分子机理。方法：间接免疫荧光细胞化学染色法检测RA FLS各组磷酸化Akt蛋白表达。Western-blot方法检测PI3K抑制剂LY294002 (20μM)对TNF-α诱导RA FLS中磷酸化BAD、IL-1β、MMP-3蛋白表达的影响以及Res对TNF-α诱导RA FLS中Akt、磷酸化Akt蛋白表达的作用。结果：荧光显微镜下观察RA FLS细胞,磷酸化Akt蛋白在TNF-Q组表达增强,而在空白组、LY294002组,磷酸化Akt蛋白基本没有表达,50μMRes组较TNF-α组,磷酸化Akt蛋白表达明显降低。Western-blot方法分析显示LY294002下调TNF-α诱导磷酸化BAD及炎性因子IL-1β、MMP3蛋白表达水平。50-200μM Res可显著降低TNF-Q诱导RA FLS磷酸化Akt蛋白水平,并呈剂量依赖关系。结论：TNF-α诱导的RA FLS增殖及IL-1β、MMP-3产生中存在PI3K/Akt信号通路的激活,LY294002可以阻断这一效应。50-200μMRes可降低Akt磷酸化水平,下调磷酸化BAD及IL-1β、MMP-3蛋白表达,抑制RA FLS增殖,发挥促凋亡及抗炎作用；Res可能在类风湿关节炎的治疗方面具有良好的临床应用前景。