【摘 要】
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目的周围神经损伤(PNI)是常见的临床疾病之一,已知micro RNAs(miRNAs)与周围神经损伤后的修复机制密切相关,前期研究已完成目标miRNAs的筛选并通过生物信息学分析预测靶基因,本研究通过细胞学实验验证SLC20A2、HSPA12A是miR-136-5p的靶基因,并研究miR-136-5p及其靶基因的体外水平功能。方法构建miR-136-5p过表达质粒及miR-136-5p干扰质粒,
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目的周围神经损伤(PNI)是常见的临床疾病之一,已知micro RNAs(miRNAs)与周围神经损伤后的修复机制密切相关,前期研究已完成目标miRNAs的筛选并通过生物信息学分析预测靶基因,本研究通过细胞学实验验证SLC20A2、HSPA12A是miR-136-5p的靶基因,并研究miR-136-5p及其靶基因的体外水平功能。方法构建miR-136-5p过表达质粒及miR-136-5p干扰质粒,转染入所培养的神经元细胞中,形成miR-136-5p过表达组及miR-136-5p干扰组两组实验组,正常神经元细胞组作为对照组。对以上三组细胞分别进行RNA的抽提和逆转录后,进行PCR检测,验证所预测的靶基因SLC20A2和HSPA12A,并通过Av/Pi试验、Transwell试验以及神经元细胞5羟色胺(5-HT)的检测,研究miR-136-5p和靶基因的体外水平功能。结果神经元细胞中靶基因的PCR检测结果显示SLC20A2和HSPA12A的表达量与miR-136-5p的表达量无明显关联。Av/Pi试验结果显示miR-136-5p过表达组凋亡水平明显增高。5-HT浓度检测结果示过表达组5-HT浓度降低显著,而干扰组5-HT浓度明显上升。Transwell试验结果显示miR-136-5p过表达、干扰的神经元细胞在细胞迁移能力上和正常神经元细胞无明显差异。结论根据目前研究尚不可认为SLC20A2和HSPA12A是miR-136-5p的靶基因。miR-136-5p上升可促进神经元细胞凋亡并抑制了5-HT水平,但对细胞迁移能力无明显影响。
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