化瘀解毒方提取物抗胃癌及其作用机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liujmjm
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癌症是导致人类死亡的主要疾病。常规的手术治疗,化学治疗和放射治疗作为主要的治疗手段广泛的用于各种肿瘤的治疗,但是这些治疗方式并不一直有效,并且存在较多的肝毒性,肾毒性和耐药性等副作用。近年来,中药已经被整个科学界所承认,并在治疗癌症方面具有较多优势例如多靶点和低毒性。在中国,尽管中药被广泛用于治疗各种肿瘤疾病,并且具有悠久历史,但是用正规科学方法去评价其药效仍然是一个崭新的领域。做为中国传统中药复方,化瘀解毒方用于治疗多种疾病。然而对于化瘀解毒方法在肿瘤的治疗及其作用机制仍然未知。本文详细评价了化瘀解毒方提取物在体内和体外的抗肿瘤作用及其潜在的作用机制。首先,我们对化瘀解毒方提取物进行了体外实验,结果表明,化瘀解毒方提取物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,半数抑制率(IC50)从1.23mg/ml到6.23mg/ml。其中人胃癌细胞株SGC-7901对化瘀解毒方提取物最敏感,处理48小时IC50达1.23mg/ml。并且化瘀解毒方提取物时间及剂量依赖性抑制SGC-7901细胞增殖。红细胞毒性实验结果显示,20 mg/ml化瘀解毒方提取物溶血率仅为30%,说明化瘀解毒方提取物对红细胞的毒性相对较低。通过对肿瘤细胞的黏附、迁移和侵袭实验研究表明,化瘀解毒方提取物显著的且剂量依赖性的抑制人胃癌细胞株SGC-7901黏附、迁移和侵袭。实时定量PCR结果显示,化瘀解毒方提取物对P13K,PDK1和Akt mRNA表达无影响。免疫印迹结果显示,化瘀解毒方提取物抑制Akt蛋白磷酸化,然而对于上游蛋白PDK1和P13K的磷酸化无作用。阳性对照药环磷酰胺显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901中PDK1和Akt蛋白的磷酸化,但是对P13K蛋白激酶的磷酸化作用不明显。以上结果说明,化瘀解毒方提取物有效抑制肿瘤细胞增殖,特别的是人胃癌细胞SGC-7901对其抑制效果最为敏感。并且可以显著抑制其黏附、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路有关。通过体外实验发现,化瘀解毒方提取物有效抑制SGC-7901细胞增殖、黏附、迁移、侵袭,并且抑制PI3K/Akt通路蛋白磷酸化。接下来我们对化瘀解毒方的作用分子机制进行详细阐述。体外激酶检测实验表明,化瘀解毒方提取物对PDK1蛋白激酶有明显的抑制作用,在体外可以剂量依赖性的抑制PDK1蛋白激酶活力,而环磷酰胺对此没有抑制作用。说明化瘀解毒方提取物通过抑制PDK1激酶活力抑制Akt蛋白磷酸化。过表达PDK1或者Akt使得细胞中Akt磷酸化水平上升。而化瘀解毒方提取物对于过表达PDK1或者Akt的SGC-7901细胞无抑制增殖、迁移、黏附及侵袭作用。与此同时,与P13K抑制剂LY294002联用进一步发挥抑制肿瘤细胞增殖、黏附、迁移、侵袭的作用。免疫共沉淀结果进一步证实化瘀解毒方提取物抑制PDK1和Akt结合。以上说明化瘀解毒方提取物通过抑制PDK1激酶活力抑制Akt磷酸化水平发挥抗肿瘤作用。最后我们通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,探讨化瘀解毒方提取物对实体瘤的作用效果并且验证其作用机制。实验结果表明,每日口服2g/kg化瘀解毒方提取物显著抑制体内肿瘤细胞的增殖,小鼠瘤重显著下降。通过对小鼠体重和脾脏指数的观察发现,口服化瘀解毒方提取物对小鼠体重和脾脏指数均无影响,而阳性对照药环磷酰胺显著降低小鼠体重和脾脏指数,说明化瘀解毒方提取物存在较低毒性。与体外实验结果一致的是,化瘀解毒方提取物不影响PI3K,PDK1及Akt蛋白的mRNA水平。通过用免疫印迹检测蛋白水平结果发现,每日口服2g/kg化瘀解毒方提取物显著降低肿瘤组织中Akt蛋白的磷酸化水平。以上实验结果说明,化瘀解毒方提取物有效抑制体内肿瘤细胞增殖,对荷瘤小鼠的体重及其脾脏指数无影响,存在较低的毒副作用,PI3K/Akt通路参与化瘀解毒方提取物的体内抗肿瘤作用。综上所述,化瘀解毒方提取物可以在体外显著抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,降低其黏附、迁移、侵袭能力。在体内显著抑制实体瘤生长,对小鼠体重和脾脏指数无影响,其作用机制与调节PI3K/Akt通路有关,对于胃癌的治疗具有较高的价值。
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