石斛，属于兰科多年生草本植物，是一种常用名贵中药，石斛的药用功效有很多如：生津益胃、滋阴清热、抗辐射、抗肿瘤等功效。研究表明，石斛生物碱，是它的重要药用成分。研究表明石斛生物碱是石斛的次生代谢产物，是由苯丙烷类途径产生。PAL—苯丙氨酸解氨酶，是苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶，本文是以铁皮石斛为实验材料，克隆出铁皮石斛的DcPAL基因，进而使其在大肠杆菌中的成功表达及荧光定量检测其在不同组织中转录水平的表达量，为深入研究苯丙氨酸解氨酶的结构与功能以及理清其次生代谢途径奠定基础。研究主要取得结果如下：1.石斛PAL苯丙氨酸解氨酶基因的克隆通过同源克隆和RACE相结合的方法，从石斛中克隆了苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的全长cDNA，命名为DcPAL (GenBank登录号为JQ765748)。DcPAL全长2458bp，开放阅读框2142bp，编码713个氨基酸。经氨基酸序列多重比较发现, DcPAL编码的氨基酸序列与蝴蝶兰等植物的PAL氨基酸序列同源性大于90%，DcPAL编码的氨基酸序列包括与拟南芥、烟草等PAL蛋白质一样的脱氨基位点和催化活性位点。DcPAL氨基酸序列的PAL系统进化树分析结果显示, DcPAL编码的氨基酸序列与兰科类植物(如蝴蝶兰)的PAL聚为一支,说明两者的亲缘关系较近。2. DcPAL基因荧光定量的表达分析通过荧光定量分析结果表明，DcPAL基因在石斛原球茎、根、假鳞茎、叶中均有表达。其中，原球茎和叶片中表达量较低且差异不明显，茎和根中有较高的表达量。3.原核表达载体构建已经成功构建了含有目的基因的原核表达载体原核表达载pETDuet-1/PAL，并实现石斛PAL在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。