本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),在大肠杆菌BL21中诱导表达,用Ni-NTA His Bind蛋白质纯化法纯化可溶的融合蛋白,Western blot分析2种重组蛋白的抗原活性。结果表明,表达的2部分蛋白分子量大小约66Ku,与预计大小相符,纯化蛋白液的浓度分别为2.964mg/ml和2.726mg/ml。2种蛋白均具有良好的抗原活性, rSapA-N比rSapA-C的免疫学活性更高(P > 0.05)。进一步以表达的rSapA-N作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法,所建立的间接ELISA检测方法特异性和敏感性良好,分别为94.3%和88.6%。用间接ELISA方法检测的70份布鲁氏菌病的阳性血清样品,有4份为胎儿弯杆菌病抗体阳性,32份牛传染性鼻气管炎的阳性血清中有2份为胎儿弯杆菌病抗体阳性,24份牛新胞子虫病的阳性血清样品中有7份为胎儿弯杆菌病抗体阳性,表明在引起牛流产的疫病中,存在多种致病微生物混合感染的情况。用上述表达的胎儿弯杆菌表面蛋白rSapA-N免疫小鼠,采用细胞融合技术,获得2株能分泌抗rSapA-N单克隆抗体的杂交瘤细胞(A2D5和C1B6),并对2株杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体进行了部分生物学特性研究。结果表明,2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的Ig亚型均为IgG1,轻链为κ链。Western blot证实2株McAb均能与rSapA-N发生特异性反应,而与其它蛋白不反应,间接ELISA测定的小鼠腹水抗体效价分别达到1:128 000(A2D5)和1:64 000(C1B6)。2株杂交瘤细胞性状稳定,经过3次反复冻存和体外20代连续培养后抗体分泌正常。以2株杂交瘤细胞株制备小鼠腹水,采用饱和硫酸铵-辛酸法纯化单抗,纯化后抗体蛋白浓度分别为4.35mg/mL(A2D5)和1.03mg/mL(C1B6)。