Galangin诱导胶质瘤细胞的凋亡及其机制

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目的:颅脑胶质瘤是人颅内最为多见的肿瘤之一,在组织学上可以被分类为:星形细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤等。其往往呈较恶性,在颅内的浸润性生长有较高的患病率和较高复发率、死亡率高和治愈率低等的特征。其根据世界卫生组织(WHO)分级I级胶质瘤大多发生于儿童并且大多预后良好,而II级胶质瘤大多拥有5-8年的中位生存期,研究表明高级别的星形细胞瘤的中位期大约为3年,而IV级的脑胶质瘤的中位生存期仅有12-18个月。Galangin是一种由高良姜根茎提取并同时存在于蜂胶中的小分子脂溶性的天然类黄酮化合物,其分子量较小,已有的研究表明其在体外试验中具有抗菌、抗病毒等的作用,如:肝癌、肺癌和食管癌等。Wnt/β-Catenin通路是一种信号通路,有研究指出该通路与组织的生长增殖、凋亡、侵袭和迁移有着相当重要的关系,同时该通路和细胞的线粒体凋亡有紧密的关系。本研究的目的在于实验Galangin对胶质瘤的增殖和凋亡的效果,在本研究中通过应用MTT测U87、U251的增殖、HOECHST 33342染色凋亡的U251、U87及使用流式細胞仪法测定凋亡的细胞等方法,详细测定Galangin在U251、U87凋亡和增殖中的具体变化,并进一步用western blot法测Galangin作用于胶质瘤细胞后其Wnt/β-Catenin信号通路和线粒体凋亡途径的蛋白表达变化情况,确定Galangin在胶质瘤的体外实验中对凋亡的诱导和促进作用,并研究分析其有关的机理。方法:1、使用MTT法的实验方法测该药物对胶质瘤U251以及U87的增长的抑制。2、应用hoechst33342染色的办法观察在非同等浓度下的两系细胞凋亡的发生情况。3、使用流式仪法测u251、u87在不同浓度的galangin作用下凋亡的情况。4、应用westernblot技术检测wnt/β-catenin信号通路、线粒体途径凋亡相关蛋白β-catenin、bcl-2、bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9、cytc、parp等的表达变化。结果:本研究结果提示药物galangin在不同的时间及浓度下对体外培养的u251、u87的生长起到了明显的抑制效果,并呈现一种与时间及剂量相关的量效关系,在galangin100μm、200μm、300μm和400μm的浓度作用于胶质瘤细胞12h、24h、48h和72h时该药物galangin对u251细胞的半数抑制率(ic50)分别为281μm、321μm、276μm和229μm,u87为289.4μm、261.1μm、247.4μm和225.3μm,在药物galangin的作用下的u251和u87细胞随着浓度及时间的增加凋亡率相应增加,通过流式仪检测细胞凋亡发现了同样的变化。wnt/β-catenin信号通路及线粒体途径凋亡相关蛋白β-catenin、bcl-2、bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9、cytc、parp等蛋白表达量在galangin作用下均有明显的改变,其结果具有统计学意义(p<0.05)。结论:通过该实验的研究表明galangin能够明显的抑制u251、u87的增殖,并能明显的诱导u251和u87的凋亡。在不同浓度的galangin作用下体外培养的胶质瘤细胞u251和u87的wnt/β-catenin和线粒体途径关键蛋白的表达有明显变化。因此galangin能明显的抑制u251、u87的增殖并能促使其凋亡,westernblot技术检测发现细胞凋亡的蛋白变化与wnt/β-catenin蛋白的表达具有一定的关联性,由此分析,galangin诱导u251、u87凋亡的作用与wnt/β-catenin通路有着密切的关系。
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