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目的探讨亚甲基蓝(MB)介导的光动力疗法(PDT)在适合波长及光能量的光源下抗菌作用和作用机理及联合碘化钾(KI)时PDT的抗菌疗效。方法通过分光光度计检测MB溶液的最大吸收峰位而决定MB介导的PDT抗菌作用的最适波长。第一部分实验实验对象为白色念珠菌标准株DAY286,首先将制备为10~7 CFU/mL的白色念珠菌悬液分成以下四组:空白对照组:无光照,不加MB;PDT组:根据MB浓度的不同将其分为10μmol/L组、50μmol/L组和100μmol/L组,与菌液孵育后给予10 J/cm~2、40J/cm~2和80 J/cm~2光照射;单纯光照组:不加MB,仅给予光照,光源条件同PDT组;单纯光敏剂组:仅加入MB,不进行光照。通过不同浓度的MB介导的PDT对白色念珠菌的杀伤作用确定MB最适浓度。其次将白色念珠菌悬液分成三组:空白对照组、PDT组和单纯光照组。(1)空白对照组:不加MB,不给予光照。(2)PDT组:将白色念珠菌悬液加入MB避光孵育30min,在适当的波长下给予不同的光能量0 J/cm~2、10 J/cm~2、20 J/cm~2、40J/cm~2、80 J/cm~2、160 J/cm~2、320 J/cm~2光的照射。(3)光照组:不加入MB,仅给予光照射,光源条件同PDT组。各组的白色念珠菌存活率使用菌落形成单位(CFU)给予测定。第二部分实验选取金黄色葡萄球菌质控菌标准菌株ACCC25923为实验对象,通过酶标仪调整光密度(OD)将其制备为10~8 CFU/mL的金黄色葡萄球菌悬液。在光能量为10 J/cm~2下,为检测MB最适浓度剂量将实验分为:(1)空白对照组:无光照,不加入MB。(2)PDT组按MB浓度将其分为0.1μmol/L组、0.2μmol/L组、0.5μmol/L组、1.0μmol/L组和5.0μmol/L组。(3)单纯MB组:仅有MB,无光照。(4)单纯光照组:不加入MB,仅给与光照。通过不同浓度的MB杀菌作用确定最适MB浓度后将实验分为:绝对对照组:不加MB及KI,不给予光照;对照组:给予MB和光照,不加KI;单纯KI组:不加MB及光照,仅加入KI;PDT(KI)组:金黄色葡萄球菌悬液与适宜浓度的MB避光孵育30 min,在给予不同浓度的KI混合均匀后进行光源照射;光照(KI)组:仅加入KI,不加光敏剂MB,予以同PDT(KI)组相同的光源照射;光敏剂(KI)组:加入MB及KI,不予任何光照。利用CFU测定各组金黄色葡萄球菌的存活率。第三部分实验使用荧光分子探针SOSG和HPF检测MB在不同光能量下产生的荧光量,初步研究MB抗菌作用机理。结果(1)光敏剂MB对白色念珠菌杀伤作用的最适浓度为100μmol/L。在光源波长为660 nm的光照射下,光能量为0~320 J/cm~2时,光能量越高,MB介导的PDT杀菌作用越强(P 0.05)。在320 J/cm~2光能量下,MB介导的PDT对白色念珠菌的杀伤作用最强,白色念珠菌存活率最低为0.000073%(P 0.05)。光能量为0 J/cm~2的PDT组及光照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P 0.05)。(2)选择MB对金黄色葡萄球菌的合适杀菌作用浓度0.2μmol/L,在光源波长660 nm,10 J/cm~2的光照射下,MB介导的PDT在联合KI后对金黄色葡萄球菌的杀伤用作加强(P 0.05)。单纯KI组、光照(KI)组和光敏剂(KI)组与绝对对照组比较,金黄色葡萄球菌菌落数差异均无统计学意义(均P 0.05)。(3)在相同光能量下荧光分子探针SOSG所测得的MB荧光量均高于HPF的荧光测得量(P 0.01)。结论(1)在160~320 J/cm~2的光能量范围内,MB介导的PDT对白色念珠菌具有较好的杀伤作用。(2)MB介导的PDT在联合KI时抗菌作用效果加强。(3)MB介导的PDT抗菌作用主要是通过Ⅱ型反应机制。