鸡白痢（pullorum disease,PD）是由鸡白痢沙门菌（Salmonella pullorum,SP）引起鸡的一种急性、系统性疾病。该病主要通过种鸡垂直传播,导致2-3周龄内雏鸡急性死亡,给养殖业造成极大危害。此病主要防控措施就是净化,目前净化常用的检测方法为血清玻板凝集法（Serum Plate Agglutination,SPA）,该方法方便、快速,但敏感性有限。因此,本研究通过免疫共沉淀的方法对优势菌株的抗原蛋白筛选鉴定,以此建立灵敏度高的ELISA方法,为临床PD净化提供良好的检测手段。首先,通过对江苏某地3个黄羽肉种鸡场的样本进行采集和细菌分离,共鉴定87株SP,分别来源于种鸡病料组织9株、死胚蛋31株、光蛋15株、雏鸡23株和环境样本9株,由此建立SP菌种库。然后,对菌种库内优势菌株SP001株进行温和裂解,与免疫后不同阶段血清免疫球蛋白纯化物进行免疫共沉淀。产物经质谱分析,与阴性组对比,共获得112个针对SP抗体的特异蛋白,再依据质谱分值和重复性确定9个候选蛋白。通过PCR克隆片段,连接至p ET-30a（+）表达载体,构建重组质粒进行原核表达,再经His镍柱纯化,得到重组蛋白进行ELISA包被,最终确定黄素蛋白（Flavoprotein,FP）用于后续实验。最后,通过对抗原包被浓度、封闭液选择、待检抗体稀释度、待检抗体反应时间、二抗浓度以及显色时间等条件优化,确定基于FP重组蛋白建立的间接ELISA方法。本方法对阳性样本检出的最高稀释倍数为1:800,同类ELISA试剂盒最高为1:200,灵敏度较高;和同属D群的肠炎以及大肠杆菌、阴沟杆菌等多种常见菌抗血清无交叉反应;重复性试验结果CV系数均低于10%,批间、批内重复性良好。综上所述,本研究分离鉴定87株鸡白痢沙门菌,建立江苏特定区域黄羽肉肉种鸡菌株资源库,并通过免疫共沉淀方法筛选到FP抗原,以此建立检测鸡白痢抗体的间接ELISA方法。结果表明该方法特异性好、灵敏度高、批间稳定,用于临床552份样本监测,结果显示阳性率在1%-5%之间。此方法的建立为鸡白痢净化提供有效的技术支持。