【摘 要】
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Cyt类蛋白是苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生和一种杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs).该研究通过对已知cyt2类基因的序列进行分析,设计了三对引
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Cyt类蛋白是苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生和一种杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs).该研究通过对已知cyt2类基因的序列进行分析,设计了三对引物,分别对应于三个亚型cyt2类基因,即cyt2Aal,cyt2Bal和cyt2Bb1;对137株Bt菌株进行了PCR扩增检测.其中,以cyt2Bal所设计的引物分别从菌株T301和T36中扩增出相同大小的目标片段;分别将两个目标片段克隆到pGEM-T Easy载体上并进行测序.测序结果显示,上述PCR产物与已知的cyt2Bal基因高度同源.将来自菌株T301的cyt2Ba类基因再克隆到E.coli/Bt穿梭质粒pHT3101上,并转化到Bt晶体缺陷型菌株4Q7中表达,经SDS-PAGE检测,发现转化菌株BtpHT301能表达Cyt2Bal蛋白,其分子量约为29kDa.对表达的Cyt2Ba蛋白进行溶细胞实验,显示该蛋白对草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)SF-9细胞有活性,作为一种Cyt类蛋白,Cyt2Ba可能在Bt杀虫剂中起着某种重要作用,值得进一步研究.
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