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生长抑素(Somatostatin,简称SST或SS)是一种多肽物质,以14肽和28肽两种形式存在,其广泛分布于脑组织、胰腺、胃肠道,少量分布在甲状腺、颌下腺、肾上腺、前列腺、胎盘、肾脏、肝脏、胆囊等组织中。SS受体在很多肿瘤细胞表面都有过度表达,如神经内分泌瘤、神经系统肿瘤和结肠癌等。SS可以特异的结合过度表达SS受体的肿瘤细胞。白喉毒素(DT)是白喉杆菌产生的细菌外毒素,有三个不同功能区。N端为催化区( catalytic domain )由193个氨基酸组成(1~193),中间为穿膜区(transmembrance)由173个氨基酸组成(205~378),C端为受体结合区( receptor binding domain)由149个氨基酸组成(386~535)。DTB(390~535)氨基酸残基组成白喉毒素的受体结合区,该区域可以用抗体或细胞因子基因取代。DTA(1~389)为毒素发生毒性作用的部位,是白喉毒素的酶活性区,它通过阻止延长因子-2在核糖体内促进多肽链延长而抑制蛋白质合成造成细胞死亡,具有极强的细胞毒性。本文利用重叠延伸PCR技术,将DT389基因片断与SS基因片断通过一个柔性肽Linker连接,经特异性酶切后,将基因片段插入到原核表达载体pET-28a中,构建了原核重组表达质粒pET-28a- DT389 -SS,测序结果与设计一致。将重组质粒转化至BL21(DE3),诱导表达后经SDS-PAGE表明,DT389-SS重组蛋白表达量占菌体蛋白总量的31%。免疫印迹分析结果显示,重组蛋白可与anti-6×histag抗体发生特异性免疫反应。从培养基的选择、诱导剂剂量的选择、诱导条件的优化等方面,研究了重组工程菌BL21(DE3)LysS/pET-28a-DT389-SS的发酵工艺,对重组工程菌进行了发酵,用MTT法测定目的蛋白对细胞生长的抑制作用,结果表明,重组蛋白对多种癌细胞的生长抑制作用明显。