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第一部分子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9及FasL表达的研究目的探讨MMP-9和FasL在子痫前期发病机制中的作用及两者间的关联。方法采用免疫组织化学法检测48例子痫前期孕妇(重度子痫前24例,轻度子痫前期24例)及24例正常晚期妊娠孕妇胎盘中MMP-9和FasL的表达定位及强度。结果MMP-9主要表达于胎盘合体滋养细胞细胞质和细胞膜内,FasL主要表达于胎盘合体滋养细胞细胞质和细胞膜内。轻、重度子痫前期组MMP-9表达水平明显低于正常晚孕组(P<0.05)。轻、重度子痫前期组FasL表达水平明显高于正常晚孕组(P<0.05)。胎盘组织中MMP-9与FasL表达水平呈负相关(r=-0.700,P<0.05)。结论1、子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9与FasL表达异常,使胎盘形成时滋养细胞入侵减少及血管重塑障碍,可能与子痫前期的发病机制有关。2、子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9与FasL的表达水平呈负相关,可能滋养细胞的侵入与其致内皮细胞凋亡作用之间存在关联,共同参与子痫前期的发生。第二部分绒毛外滋养细胞中MMP-9表达对FasL分泌的作用和机制的研究目的通过脂质体转染MMP-9siRNA,探讨绒毛外滋养细胞株TEV-1中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对可溶性Fas配体(sFasL)表达的调控。方法1、化学合成MMP-9siRNA,通过脂质体转染绒毛外滋养细胞株TEV-1。2、RealTime RT-PCR、ELISA检测MMP-9siRNA转染效率,ELISA检测细胞内、外FasL蛋白表达的变化。3、给予外源性MMP-9,ELISA检测细胞内、外FasL蛋白表达的变化。结果1、转染后,MMP-9 siRNA组的MMP-9 mRNA表达量与对照组相比显著降低,(P<0.05); MMP-9 siRNA组的FasL mRNA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。2、转染后,MMP-9 siRNA组的MMP-9蛋白分泌表达与对照组中的表达量相比明显降低,(P<0.05); MMP-9 siRNA组细胞内的MMP-9蛋白表达与对照组中的表达量相比明显降低(P<0.05)。转染后,MMP-9 siRNA组的FasL蛋白分泌表达与对照组中的表达量相比明显降低,(P<0.05)；而MMP-9 siRNA组细胞内的FasL蛋白表达与对照组中的表达量相比明显增多,(P<0.05)。3、外源性MMP-9蛋白作用后,MMP-9 siRNA组及对照组中细胞外分泌的FasL蛋白表达均较作用前明显增多(P<0.05)；而MMP-9 siRNA组及对照组中细胞内的FasL蛋白表达均较作用前明显减少(P<0.05)。结论1、化学合成的MMP-9 siRNA能有效、特异性沉默TEV-1细胞株中的MMP-9基因。2、TEV-1细胞中MMP-9蛋白分泌表达影响细胞内、外FasL蛋白表达。3、外源性MMP-9蛋白也影响TEV-1细胞内、外FasL蛋白表达。第三部分MMP-9在绒毛外滋养细胞致内皮细胞凋亡中的作用和机制的研究目的通过脂质体介导转染MMP-9 siRNA,探讨绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达对血管内皮细胞凋亡的影响。方法1、在transwell上室培养TEV-1细胞株,并以脂质体介导转染MMP-9 siRNA及其对照至TEV-1。2、在transwell下室培养EVC-304细胞株,使TEV-1和EVC-304非接触性共培养。3、共培养后收集下室细胞及上清液,流式细胞仪检测EVC-304细胞的凋亡率。4、单独培养EVC-304,给予外源性MMP-9,流式细胞仪检测不同时间段EVC-304的凋亡率。结果1、共培养体系中,MMP-9 siRNA组的滋养细胞所致内皮细胞凋亡率比对照组有明显降低(P<0.05)；在MMP-9 siRNA+MMP-9组,内皮细胞凋亡率较MMP-9 siRNA组明显增多(P<0.05)；对于对照+MMP-9组,内皮细胞凋亡率较对照组明显增多(P<0.05)。2、MMP-9直接单独作用于内皮细胞后,不同时间段的内皮细胞凋亡率无显著性差异(P<0.05)。结论1、绒毛外滋养细胞分泌MMP-9的改变导致其诱导内皮细胞凋亡的改变。2、滋养细胞分泌MMP-9致内皮细胞凋亡率改变,是通过MMP-9对滋养细胞分泌FasL蛋白的调控实现的。