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随着糖化学、糖生物学、糖工程学发展,人们已认识到多糖物质具有重要的生物学功能,在工农业生产中有着广泛的应用前景;20世纪90年代以来,多种新方法、新技术被应用于多糖物质的研究中,一些不同生理活性的多糖物质被分离、纯化和鉴定,部分研究成果所形成的产品已投放市场,并显示出良好的经济效益。但大多数多糖产品主要来自高等植物和海藻及较大型的真菌,这在一定程度上限制了多糖的生产、应用及产业化进程。 近年来,由于细菌多糖具有结构功能稳定、价格便宜、生产周期短及生产可控等优点而倍受关注。本文对一株高产胞外多糖的细菌菌株进行了研究,主要内容为:菌株分离、筛选,发酵工艺优化、多糖提取工艺优化、多糖制品化学组成分析及其应用。 出发菌株为课题组自行分离所得的一株多糖产量较高的菌株,经生理生化特性分析及16S rDNA序列鉴定,鉴定该菌株为土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)的放射形土壤杆菌(A.radiobacter),菌株编号为GY04。 本课题组历经二年左右时间,做了大量的工作,并取得了如下阶段性进展: 1.采用无氮培养基、复筛培养基及基本发酵培养基从贵阳市郊土壤中筛选得到一株野生菌株,编号为GY04。经形态学观察、生理生化特性分析及16S rDNA序列分析,确定该菌株为土壤杆菌属的放射形土壤杆菌(A.radiobacter)。 GY04为革兰氏阴性菌,细胞呈杆状,大小为1.2μm~1.8μm×0.5μm~0.8μm,单个或成对;荚膜染色显示,该菌株可产生荚膜;在基本发酵培养基上,28℃培养3~4d,菌落呈乳白色、有光泽、不透明、中凸、圆整、粘稠,菌落直径1cm左右。 GY04菌株好氧,生长温度范围为4℃~42℃,最适温度28℃,生长pH范围4~9,最适pH为7.0左右,不产色素,无芽孢,无动力,不能利用柠檬酸盐,可以产生3-酮基乳糖,并且可以利用乙醇氧化产酸,在石蕊牛奶培养基中产酸。 GY04菌株生长的延滞期为0~6h,6h后进入对数生长期,至96h生长量达到最大,96h至120h是GY04菌株生长的稳定期,120h后进入衰亡期。 2.GY04菌株的生长与产胶为非偶联型,对数生长期结束后开始分泌大量的胞