在昆虫生长发育的过程中，蜕皮激素控制着昆虫的蜕皮，使昆虫可以顺利地向下一个生长阶段发育；在目前已经研究过的miRNAs中，也有一些miRNAs调控着昆虫的生长发育，起着和激素相似的作用。那么，在激素和miRNA之间是否存在相互调控关系呢?如果存在相互调控关系，那又是谁调控谁呢?针对这些问题，前人在果蝇等昆虫中进行了大量研究，并已经证实，蜕皮激素可以调控某些miRNAs的表达。 家蚕作为经典遗传学研究的模式生物之一，我们想知道，在家蚕体内蜕皮激素和miRNA之间是否也存在着调控关系呢?本文针对这一问题，以bmo-let-7 miRNA及其候选靶基因Bmlin-28和Bmlin-41作为对象进行了研究。获得的主要研究结果如下： 1、家蚕Bmlin-28和Bmlin-41基因的克隆与序列分析以及表达情况研究 克隆了异时性基因Bmlin-28和Bmlin-41，并通过RT-PCR对其发育时期特异性和组织特异性表达模式进行了调查。 Bmlin-28基因开放阅读框(ORF：119-473)长为354bp，编码117个氨基酸，由4个外显子和3个内含子构成。其蛋白结构具有一个冷休克蛋白结构域CSP和两个CCHC锌指结构域。在动物中，冷休克蛋白CSP被认为是Y-BOX蛋白家族成员，其功能是抑制蛋白翻译和调节mRNA的稳定性。CCHC锌指结构域具有核酸结合功能，被认为是转录后调控因子。 对lin-28进行同源性分析，并使用Clustalx对它们进行聚类分析，表明lin-28在各物种当中进化是相当保守的。 对Bmlin-28基因的表达情况进行研究，发现Bmlin-28基因在5龄3天大造品种的家蚕卵巢、精巢、血液中特异表达，其中在卵巢中的表达量为最高。在3龄期之前家蚕中的表达量要高于3龄后期。 Bmlin-41开放阅读框(ORF)长为2166bp，编码721个氨基酸，该基因ORF是一个单外显子。其蛋白结构具有2个功能结构域，分别是NHL和B-BOX。其中，NHL被认为具有催化酶的作用，可以催化蛋白C端发生a-氨基化，B-BOX是一种RNA结合锌指蛋白。 对lin-41进行同源性分析，发现lin-41基因在各个物种之间的同源性较低。使用Clustalx对它们进行聚类分析，表明家蚕Bmlin-41钉和以上几种物种lin-41基因有两段氨基酸序列相对较保守，这两段氨基酸序列恰好是该基因的NHL和B-BOX这两个功能结构域。 对Bmlin-41基因的表达情况进行研究，发现Bmlin-41基因在家蚕1龄早期和4龄早期高量表达，2眠、3龄中期、4龄中期、5龄3天次之，除了在3眠和4眠RT-PCR未检测到表达外，在其他时期也都有微量表达。5龄3天Bmlin-41在家蚕卵巢中高量表达，在头部、中肠和脂肪体内也有微量表达，而在其它组织中几乎没有表达。 2、家蚕Bmlin-28和Bmlin-41基因3UTR的克隆与序列分析 克隆了Bmlin-28基因的3UTR和Bmlin-41基因的3UTR。 Bmlin-273UTR长585bp，与Bmlin-28基因拼接后总长为1051bp，使用RNAhybrid在线预测，发现在拼接后序列的854位和961位有两个bmo-let-7的靶位点。 Bmlin-413UTR长1266bp，与Bmlin-41基因拼接后总长为3555bp，使用RNAhybrid在线预测，发现在Bmlin-41基因3UTR上有两个bmo-let-7的靶位点，分别位于3UTR的780位和919为，即位于拼接后序列的2946位和3085位。 3、蜕皮激素对bmo-let-7的诱导研究 用不同浓度的蜕皮激素处理家蚕卵巢细胞系BmN-SWU1和BmN-SWU2以及胚胎细胞系BmE，然后用Northern杂交检测bmo-let-7表达量的变化情况。我们发现，不同浓度蜕皮激素对bmo-let-7的诱导效果各不相同，并且用以实验的细胞种类和诱导时间也是影响诱导效果的重要因素。