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由家蚕核多角体病毒(BmNPV)引起的脓病是很常见的蚕病,常常引起蚕业经济上很大的损失,因此有效的防治由BmNPV引起的蚕病是一个急需解决的重要课题,同时也为研究杆状病毒提供了模式病毒.RNA干扰(RNA interfering,RNAi)是一种序列特异性的降解靶mRNA的基因调节机制,由于RNAi具有抵抗病毒侵入,抑制转座子活动,防止自私基因序列的过量增殖等作用,科学家已开始应用RNAi技术来进行人类疾病的探索.该实验中在国际上首次应用BmNPV来研究RNAi,以BmNPV复制必需的DNA解旋酶基因和DNA聚合酶基因为靶序列,人工设计并合成了长度分别为435bp(Ap<,1>),300bp(Ap<,2>)和399bp(A<,H>)的三条dsRNAs,利用TransMessenger transfection Reagent转染家蚕细胞,研究其对BmNPV复制的抑制效果.结果表明,在野生型病毒BmNPV感染家蚕细胞实验中,Ap<,2>和A<,H>这两个dsRNA能够有效的抑制病毒DNA的复制,并且在转染dsRNA后第四天抑制效果最佳,使病毒滴度(以空斑形成单位PFU/ml值表示)降低了10<3>~10<4>倍,而另外一个dsRNA(Ap<,1>)没有明显的抑制效果.DNA斑点杂交结果表明作为阳性对照的正常家蚕细胞BmN的胞内总DNA无杂交信号,而分别转染了A<,p2>和A<,H>的家蚕细胞其内病毒DNA的含量与阴性对照相比减少了72.3%和63.4%.RT-PCR结果也表明两种目的基因在转录水平上的表达量在dsRNA的用量为2μg/well时,两种目的基因(DNApolymerase和DNA helicase)的表达水下调了78.27%和86.70%,而其他用量时目的基因的表达水平只有略微的变化.此外,该实验还对转染试剂的转染效率和细胞毒性;dsRNA在家蚕细胞内的分布进行了初步的研究.结果发现TransMessenger transfection Reagen的转染效率为60~70%,当用量超过16μl时,对家蚕细胞有毒副作用.用荧光显微镜观察FAM标记的dsRNA在细胞内的定位,发现在转染24小时后,dsRNA开始越来越多的聚集在细胞核的周围,并呈不连续分布,细胞内的荧光强度也越来越强.dsRNA在家蚕细胞中可以维持5天的时间,但到第6天时细胞内已检测不出荧光信号.综上所述,通过选择BmNPV复制最关键的必需基因作为靶分子,设计合成针对性的dsRNA可以有效的发挥RNAi作用,抑制病毒DNA的复制.dsRNA抗BmNPV的可行性为昆虫杆状病毒抑制研究提供了模式,也为将来RNAi在治疗人类病毒性疾病方面提供了参考.