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目的：探讨siRNA联合沉默mdr-1、mrp-1与单基因沉默逆转肝细胞癌多药耐药的效果的差异。方法：借鉴本课题组前试验高效siRNA筛选试验结果,选用高效mdr-1-siRNA、mrp-1-siRNA干扰序列。按照pSUPER设计要求合成送上海生工公司合成64bp,针对HepG2/mdr-1、HepG2/mrp-1的寡聚链核苷酸,退火后双酶切法克隆,得到质粒pSUPER-HepG2/mdr1-si、 pSUPER-HepG2/mrp-si。转染感受态大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序证实后扩增培养并提取,然后转染融合达90%以上的HepG2/mdr细胞。设计肝细胞多耐药未转染组作为空白对照组pSUPER-mdr-1-siRNA、pSUPER-mrp-1-siRNA分别转染耐药细胞作为阳性实验对照组,双基因同时转染为实验组。实时PCR检测MDR-1-mRNA、MRP-1-mRNA表达情况；流式细胞术检测周期及凋亡分析,检测细胞内凋亡因子表达、活性因子CCK-8、IC50、细胞存活数量等变化了解肝癌细胞耐药性情况。结果：本次试验成功构建pSUPER-HepG2/mdr-l-si、 pSUPER-HepG2/mrp-1-si o基因测序证实靶序列插入正确,通过质粒载体将小分子干扰序列顺利导入HepG2耐药细胞。(1)质粒转染成功后细胞稳定生长,Real time-PCR检测耐药基因表达情况mrp-1-mRNA在HepG2/mm-si组与针对该基因设计的单基因沉默组(HepG2/mrp-1-si)的表达差异无显著性(P>0.05)；mdr-1-mRNA在HepG2/mm-si组与针对该基因设计的单基因沉默组(HepG2/mdr-1-si)的表达差异无显著性(P>0.05)。(2)使用5-FU(25mg/L)后,HepG2/mm-si组耐药细胞株Caspase-3活性明湿高于HepG2/mrp-1-si,差别有统计学意义(14623.7±338.9vs13215.7±90.6,p<0.05); HepG2/mm-si组与HepG2/mdr-1-si的Caspase-3活性差值无统计学意义,(14623.7±338.9vs14213±51.3,P>0.05)。(3)耐药细胞使用5-FU(25mg/L)后,CCK-8法检测细胞活性,结果表明双基因沉默组的细胞活性、细胞数目均明显较其他各组细胞活性降低,差异有显著性(P<0.05)。(4)各组耐药细胞对5-FU耐药倍数检测发现,相对HepG2/mm-si组,对照组HepG2/mdr-1-si、HepG2/mrp-1-si的耐药倍数分别为1.39倍、1.58倍。(5)细胞周期及凋亡分析提示HepG2/mm-si组耐药细胞株凋亡期细胞数量明显少于HepG2/mrp-l-si, HepG2/mdr-1-si差异有非常显著性(P<0.05)结论：(1)同一细胞同时导入2个不同的siRNA质粒载体序列不会相互干扰对方的基因表达和沉默效应变化。(2)肝细胞癌多耐药为多种耐药蛋白共同作用所导致,同时抑制两种多耐药基因的mRNA表达,能更大程度地逆转肝细胞癌多耐药性。(3)多基因同时干扰可能是未来逆转HCC多耐药的发展趋势。