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蜂胶(Propolis)是蜜蜂采集植物树脂并与自身上颚腺、蜡腺等分泌物混合加工而成的胶状粘性物质。蜂胶作为一种天然产物,其化学组成十分复杂,同时已有大量研究表明其具有抑菌、抗氧化、保肝护肝、抗炎等多种生物学活性,目前已广泛用于保健品、化妆品等行业。 巴西绿蜂胶(Brazilian Green Propolis,BGP)产于巴西中南部,其植物来源是酒神菊属(Baccharis)植物,因其特有的化学成分与良好的保健功效而得到了世界各国广泛的关注。蜂胶的化学成分受植物来源、采胶季节以及蜂种等多种因素的影响,存在显著的差异,具有高度的可变性,这就给蜂胶的质量控制造成了巨大的困难。同时,大量研究表明,BGP具有抑菌、抗氧化以及抗炎等多种生物学活性,若能将化学成分与生物学活性结合,对BGP进行质量控制,是一种全面有效的评价方法。 基于以上背景,本研究采用高效液相色谱法(HPLC)建立BGP的化学指纹图谱,确定共有成分峰,同时对共有特征成分进行定量测定;同时测定BGP和共有特征成分的DPPH自由基清除活性以及抑菌活性;最后利用多元线性回归分析,将BGP的HPLC指纹图谱分别与DPPH自由基清除活性和抑菌活性结合,建立谱效关系,筛选具有抗氧化活性与抑菌活性的成分。主要的研究内容与结果如下: 1.首先对巴西蜂胶样进行样本的筛选。采用分光光度法测定了23个不同来源的巴西蜂胶样的总黄酮和总酚酸含量,同时利用HPLC对阿替匹林C进行定量测定。结果表明,样8与样11的总黄酮、总酚酸及阿替匹林C含量均明显低于其他样品,不适合作为BGP样本。 2.利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),优化建立了BGP的HPLC化学指纹图谱,确定共有成分峰,并对共有特征成分进行定量测定。利用文献资料与标准品对比的方法确定了10种共有特征成分,分别为咖啡酸、绿原酸、p-香豆酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸、山奈素、山奈酚和阿替匹林C。 3.对BGP及共有特征成分单体进行DPPH自由基清除活性的测定,利用多元线性回归分析建立了BGP的HPLC指纹图谱与DPPH自由基清除活性的谱效关系。结果表明,9种共有特征成分对BGP样的抗氧化活性贡献率为咖啡酸>3,4,5-三咖啡酰奎宁酸>异绿原酸C>异绿原酸B>山奈素>阿替匹林C>绿原酸>异绿原酸A>山奈酚。 4.对BGP进行抑菌活性的测定,利用多元线性回归分析建立了BGP的HPLC指纹图谱与抑菌活性的谱效关系。结果表明,10种共有特征成分对蜂胶样的抑菌活性贡献率为异绿原酸A>山奈酚>异绿原酸B>阿替匹林C>异绿原酸C>p-香豆酸>山奈素>绿原酸>咖啡酸>3,4,5-三咖啡酰奎宁酸。