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目的:本实验以体外培养的方法,将达到完全缓解标准的急性髓细胞白血病患者骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞(TD-BMNC)与袪毒汤含药血清共同培养,观察含药血清对此来源的树突状细胞(DC)分化成熟的影响。用此法诱导分化的树突状细胞(DC)与纯化的正常人和缓解期患者外周血T细胞共同培养,得到激发T细胞,用激发的T细胞与白血病细胞株(K562)共同培育,以MTT法测定该T细胞对K562细胞株的杀伤活性,探讨祛毒汤对急性髓细胞白血病完全缓解期患者DC的免疫功能的影响。方法:第一、应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从ANLL-CR患者骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞(TD-BMNC),用含10%FBS的RPMI1640培养液调整TD- BMNC细胞浓度后加入24孔板中培养,培养9d,隔日换液1次,以不同浓度中药含药血清、中药含药血清联合细胞因子(GM-CSF、IL-4、TNF-α)、细胞因子、空白血清组分别培养。第二、在培养过程中观察细胞的形态,并拍照。第三、用FITC标记的CD-1a、HLA-DR和CD86抗体标记各组细胞,用流式细胞仪检测各组的DC表面标志CD-1a、HLA-DR和CD86分子的表达率。第四、分别收集纯化的同种异体T细胞、ANLL-CR患者自体T细胞,与AML-CR患者TD-MNC来源的DC以10:1比例加入24孔培养板培养5d,培养基中加入100U/ml的IL-2进行同种异体T细胞及自体T细胞的激发。第五、激发后的各组T细胞与K562细胞分别以10:1、20:1、40:1效:靶比例培养24h,MTT法检测不同条件培养的DC诱导T细胞的杀伤效应。结果:1用倒置显微镜观察发现袪毒汤含药血清组、含药血清联合细胞因子组、细胞因子组DC的形态无差别。2袪毒汤各剂量组,细胞因子联合袪毒汤各剂量组,细胞因子组与空白血清组诱导DC的CD-1a、CD86、HLA-DR的表达比较有显著差异(P<0.01),均优于空白血清组;袪毒汤低剂量组、袪毒汤中剂量组与细胞因子组诱导DC的CD-1a表达有差异(P<0.05),袪毒汤高剂量组、细胞因子联合袪毒汤低、中剂量组与细胞因子组CD-1a的表达有显著差异(P<0.01);细胞因子联合袪毒汤高剂量组与袪毒汤高剂量组CD-1a有差异(P<0.05);细胞因子联合袪毒汤高剂量组与细胞因子联合袪毒汤低、中剂量组诱导DC的CD-1a有差异(P<0.05)。祛毒汤高组与细胞因子组诱导DC的CD86表达差异(P<0.05);袪毒汤高剂量组与袪毒汤低剂量组诱导DC的CD86的表达有差异(P<0.05)。袪毒汤低、中、高剂量组和细胞因子联合袪毒汤低、中组诱导DC的HLA-DR的表达与细胞因子组诱导DC的HLA-DR的表达有显著差异(P<0.01),细胞因子联合袪毒汤中剂量组与袪毒汤中剂量组有显著差异(P<0.01);细胞因子联合袪毒汤高剂量组与袪毒汤高剂量组有显著差异(P<0.01)。3各组激活T细胞对K562细胞均有杀伤作用,各组别与空白血清(KB)组杀伤率均有显著差异(P<0.01),各组别均优于空白血清组。各组内比较:正常人T细胞袪毒汤中剂量组40:1与10:1效靶比杀伤率有显著差异(P<0.01),余各组无差异,正常人T细胞袪毒汤中剂量组20:1与10:1效靶比有差异(P<0.05);正常人T细胞袪毒汤中剂量联合细胞因子组10:1与40:1效靶比有差异(P<0.05),正常人T细胞袪毒汤中剂量联合细胞因子组20:1与40:1效靶比有差异(P<0.05),余各组之间效靶比无差异。患者T细胞袪毒汤中低剂量组效靶比40:1与10:1有差异(P<0.05),余各组效靶比之间无差异(P>0.05)。结论: 1急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞经袪毒汤含药血清诱导培养可获得具备典型特征和细胞表型的DC.2袪毒汤含药血清诱导的DC激活的T淋巴细胞能够特异性杀伤K562肿瘤细胞。