探针编码实时PCR的基因分型研究

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本论文围绕探针编码技术基因分型展开了研究,研究工作主要包括探针编码技术的提出和基本原理,以及探针编码技术在三种不同研究对象基因分型中的应用。第一章,提出了一种用于基因分型的新型探针编码技术,并对其基本原理和设计规则进行了系统的说明。探针编码技术通过不同荧光染料的组合标记靶序列,利用实时PCR过程中采集到的荧光信号来判断基因型。它可以超越实时PCR仪器检测通道的限制,具有高通量,简单快速,特异性强等优点,极大地提高了实时PCR基因分型的能力。第二章,以食源性致病菌蜡样芽孢杆菌为研究对象,建立了探针编码技术实时PCR基因分型的检测体系,并进一步应用于7株已知基因型的菌液标本的分型,均得到与测序一致的结果。第三章,应用探针编码技术区分人乳头瘤病毒15种基因型。系统地考察了探针编码技术在四色荧光PCR仪器上进行基因分型所能达到的理论极限情况,即用4种荧光染料区分15种基因型,并在实验中得以实现。另外,还模拟临床中可能出现的HPV双重感染情况,通过调整两种染料荧光值的比例,对其进行了准确的区分。在此基础上,完成两份临床标本的基因分型。第四章,以RNA假病毒作为质控品结合探针编码技术,对中国地区常见的6种基因型进行区分,建立了简单快捷,便于质控的HCV RT-PCR分型体系,并对10份厦门地区ELISA检测阳性的临床标本进行分型,均可准确确定基因型。与传统的基因分型技术相比,探针编码技术具有设计简单,特异性强,高通量等优点。探针编码技术的检测通量接近于低通量基因芯片,但操作和结果判断更为简便,可以广泛应用于基因分型领域。
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