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目的:通过制备临床验方化毒补虚方大鼠含药血清,体外培养人肺腺癌A549细胞,采用现代研究方法,检测其抑制率、凋亡率及凋亡抑制相关基因Survivin、livin的表达情况,探讨化毒补虚方治疗肺癌的作用机制。 方法:(1)应用倒置显微镜观察不同浓度含药血清作用于人肺腺癌A549细胞后对其形态学的影响,同时应用MTT法检测不同浓度含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。(2)应用Annexin FITC-Ⅴ/PI双染色流式法检测不同浓度含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。(3)应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测化毒补虚方作用于人肺腺癌A549细胞后Survivin、livin基因的表达情况。 结果:(1)分别观察化毒补虚方12.5%含药血清组、25%含药血清组、50%含药血清组、空白血清组、顺铂组作用于人肺腺癌A549细胞24h、48h时,在倒置显微镜下观察细胞的生长状态,各含药血清组:部分细胞体积变小,形体皱缩,形态变成不规则状,贴壁不良,少许细胞脱落聚集且随着含药血清浓度的升高,上述异常生长细胞增多。空白血清组细胞生长良好,顺铂组脱落细胞最多,出现细胞凝集团块,多数细胞贴壁不良,细胞体积变小。MTT法检测12.5%含药血清组、25%含药血清组、50%含药血清组、空白血清组、顺铂组作用于人肺腺癌A549细胞24h、48h的抑制率,实验结果经统计学分析显示:12.5%含药血清组的抑制率与同一时间点空白血清组比较,无明显统计学意义(P>0.05)。25%含药血清组、50%含药血清组的抑制率与同一时间点空白血清组比较,有统计学意义(P<0.05),各组抑制率与同一时间点顺铂组比较,均有显著的统计学意义(P<0.01),说明化毒补虚方对人肺腺癌A549细胞具有增殖抑制作用。其增殖抑制作用与含药血清浓度-时间呈正相关关系,即随着作用时间的延长和含药血清浓度的增加,其增殖抑制作用增强。化毒补虚方50%含药血清组作用于人肺腺癌A549细胞48h时,其抑制率最高,为21.650±9.515%。(2)用Annexin FITC-V/PI双染色流式法分别检测化毒补虚方12.5%含药血清组、25%含药血清组、50%含药血清组、空白血清组、顺铂组作用于人肺腺癌A549细胞24h、48h时的凋亡率,实验结果经统计学分析显示:化毒补虚方12.5%含药血清组、25%含药血清组、50%含药血清组与同一时间点空白血清组比较,有显著的统计学意义(P<0.01),说明化毒补虚方对A549细胞具有明显的诱导凋亡作用。其诱导凋亡作用与含药血清浓度-时间呈正相关关系,即随着作用时间的延长和含药血清浓度的增加,其诱导凋亡作用明显增强。化毒补虚方50%含药血清组作用于人肺腺癌A549细胞48h时,其凋亡率最高,为15.90±0.99%。(3)应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测48h时抑制率与凋亡率最高的50%的含药血清组与空白血清组A549细胞SurvivinmRNA、livin mRNA的表达情况,实验结果经统计学分析显示:化毒补虚方50%含药血清组作用于人肺腺癌A549细胞48h时Survivin mRNA、livin mRNA表达均下降,与空白血清组比较有统计学意义(P<0.05)。说明化毒补虚方具有下调Survivin、livin基因的表达。 结论:(1)化毒补虚方对人肺腺癌A549细胞有增殖抑制作用,在一定时间内表现出相关的量-效关系。(2)化毒补虚方对人肺腺癌A549细胞有明显的诱导凋亡作用,在一定时间内表现出明显的量-效关系。(3)化毒补虚方能下调人肺腺癌A549细胞中Survivin、livin基因的表达,这可能是其治疗肺癌的作用机制之一。