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第一部分M型乙酰胆碱受体蛋白在豚鼠前庭中的表达的实验研究[目的]mAChRs在中枢和外周神经系统中广泛表达,并在调节细胞活动和功能中起着重要的作用。乙酰胆碱(acetylcholine, ACh)是哺乳动物主要的内耳传出神经递质,在外周前庭系统中存在各种毒菌碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor, mAChR)和烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)。目前的研究表明M1-M5型乙酰胆碱受体在哺乳动物前庭终器中均有表达,但这些受体蛋白在豚鼠前庭中的表达尚无报道,本实验研究编码M型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor, mAChR)的蛋白在豚鼠前庭终器中的表达。[方法]从豚鼠内耳中分离出前庭组织分别提取半规管(水平半规管,垂直半规管,后半规管),球囊,椭圆囊蛋白,应用western blot法检测M1-M5 mAChR蛋白在以上前庭终器中的表达。[结果]在豚鼠前庭终器(半规管,椭圆囊,球囊)中均可检测到M1-M5 mAChR蛋白的表达。[结论]本研究运用western blot的方法成功的检测出M1-M5 mAChR蛋白在豚鼠前庭终器(半规管,椭圆囊,球囊)中的表达,由此为M1-M5 mAChR在豚鼠前庭中的存在提供证据,并证实M1-M5 mAChR也可能在介导前庭毛细胞胆碱能传出过程中起到重要的作用,进而为前庭疾病机制阐明及前庭疾病的治疗提供理论基础。第二部分M型乙酰胆碱受体在豚鼠前庭终器中的表达的实验研究[目的]目前研究证实乙酰胆碱(acetylcholine, ACh)在外周前庭系统中广泛表达,在哺乳动物内耳中存在各种毒菌碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor, mAChR)和烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR),是哺乳动物内耳的主要传出神经递质。目前的研究表明M1-M5型乙酰胆碱受体在哺乳动物前庭终器中均有表达,但这些受体在豚鼠前庭组织中的表达尚无报道,本实验研究编码M1-M5型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor, mAChR)的mRNA在豚鼠前庭终器(半规管,椭圆囊,球囊)中的表达。[方法]从豚鼠内耳中分离出前庭组织并提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测编码M1-M5mAChR的mRNA是否在豚鼠前庭组织中有表达。[结果]在豚鼠前庭终器中可检测到编码M1-M5 mAChR基因的mRNA的表达,经测序证实其与预计扩增的cDNA序列一致。[结论]本研究运用RT-PCR的方法成功的检测出编码M1-M5 mAChR基因的mRNA在豚鼠前庭终器中的表达,由此为M1-M5 mAChR在豚鼠VHCsⅡ中的存在提供证据,并证实M1-M5 mAChR也可能在介导前庭毛细胞胆碱能传出过程中起到重要的作用,进而为前庭疾病机制阐明及前庭疾病的治疗提供理论基础。第三部分m型乙酰胆碱受体在豚鼠前庭毛细胞中的表达的实验研究[目的]目前研究证实乙酰胆碱(acetylcholine, ACh)在外周前庭系统中广泛表达,在哺乳动物内耳中存在各种毒菌碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor, mAChR)和烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR),是哺乳动物内耳的主要传出神经递质。目前的研究表明M1-M5型乙酰胆碱受体在哺乳动物前庭终器中均有表达,但这些受体在豚鼠前庭毛细胞中的表达国内外尚无报道,本实验研究编码M1-M5型乙酰胆碱受体(M1-M5 muscarinic acetylcholine receptor, M1-M5 mAChR)的mRNA在豚鼠前庭终器及Ⅱ型前庭毛细胞(vestibular hair cell, VHC)中的表达。[方法]从豚鼠前庭组织中分离出Ⅱ型前庭毛细胞,在显微操作仪器下应用玻璃电极捕获单个Ⅱ型前庭毛细胞,应用单细胞RT-PCR(single cell reverse transcription polymerase chain reaction, SC-RT-PCR)法检测编码M1-M5 mAChR的mRNA是否在豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞中有表达,从而明确M1-M5 mAChR在前庭组织中的细胞定位。[结果]编码M1-M5 mAChR基因的mRNA在豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞中均可被检测到,经测序证实其与预计扩增的cDNA序列一致。[结论]本研究运用单细胞RT-PCR的方法检测编码M1-M5 mAChR的mRNA在豚鼠VHCsⅡ中的表达,由此为M1-M5 mAChR在豚鼠VHCsⅡ中的存在提供证据,并证实M1-M5mAChR也可能在介导前庭毛细胞胆碱能传出过程中起到重要的作用,进而为前庭疾病机制阐明及前庭疾病的治疗提供理论基础。