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目的建立可靠的免疫治疗动物模型,观察肿瘤生长的侵袭性、生长阶段和病理学改变等生物学特性。制备肿瘤细胞混合抗原肽,重组HSP70肿瘤抗原肽复合物(HSP70- PC)研究HSP70-4T1乳癌细胞混合肽对小鼠淋巴细胞的激活、增值、诱导特异性肿瘤免疫应答和对BALB/C小鼠4T1乳腺癌的免疫保护作用。探讨HSP70-PC修饰后的DC抗肿瘤作用。并比较两种途径治疗所需肿瘤抗原肽的剂量。方法30只BALB/C小鼠胸部脂肪组织内注射4T1肿瘤细胞,观察小鼠生命体征变化及肿瘤生长情况。分别于2、3、4周取原位肿瘤及小鼠的肺、肝组织观察肿瘤转移情况并作病理切片检查。冻融法获取4T1乳癌细胞混合抗原肽,体外构建HSP70-4T1乳癌细胞混合肽复合物。体外实验MTT法检测HSP70-4T1乳癌细胞混合肽复合物对BALB/C小鼠淋巴细胞的激活、增殖作用以及增殖后淋巴细胞对4T1肿瘤细胞的特异杀伤作用。用HSP70-4T1乳癌细胞混合肽免疫小鼠后,观察4T1乳癌原位生长情况。检测BALB/C小鼠DC经该复合物修饰成熟后IL-12和TNFa的分泌。检测修饰后成熟DC对BALB/C小鼠脾淋巴细胞的增殖作用及增殖后淋巴细胞对4T1细胞的杀伤功能。BALB/C小鼠注射修饰成熟DC,观察该方法对4T1乳腺癌的抑制作用。结果注射1×105个4T1细胞BALB/C小鼠均能在原位生长肿瘤,注射后3周在解剖镜下可观察到肺转移的集落结节;4周发生肿瘤肝转移。冻融法所获得的抗原肽为混合抗原肽。MTT法检测显示HSP70-4T1乳癌细胞混合肽能体外刺激BALB/C小鼠淋巴细胞的增殖(P<0.05);增殖后淋巴细胞4T1肿瘤细胞杀伤率(64.2±8.70)%(P<0.05)。用HSP70-4T1乳癌细胞混合肽免疫后动物,能明显抵抗4T1肿瘤生长(P<0.05)。0.75μg抗原肽与HSP70结合,可使1×10~6 DC成熟;成熟后的5×10~3 DC可激活2×10~6小鼠脾淋巴细胞。与直接用HSP70-4T1复合物刺激脾细胞比较,DC途径抗原肽的用量减少40倍。增殖后淋巴细胞对4T1细胞杀伤率(60.24±6.23)%。接种该DC能有效地抑制肿瘤的生长。结论BALB/C小鼠4T1乳癌转模型重复性好,是研究肿瘤生长、转移及肿瘤免疫学研究的理想模型。体外构建HSP70-4T1乳癌细胞混合肽能诱导BALB/C小鼠特异性肿瘤免疫应答,对BALB/C小鼠4T1乳癌模型产生较好的免疫保护作用。重组乳腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物能够诱导DC成熟,成熟后的DC能激活淋巴细胞并抑制肿瘤生长。该途径能有效降低肿瘤免疫治疗时抗原肽的使用剂量。