论文部分内容阅读
聚乳酸羟基乙酸（PLGA）分子材料具备相对较好的生物可降解性和相容性，已经广泛地在纳米载药系统研究中运用。PLGA纳米粒作为蛋白质疫苗载体的应用具有很大潜力，目前已有研究发现与可溶性抗原相比，颗粒性抗原可能具备更强的诱导免疫反应的能力，并且在纳米粒子表面修饰正电荷后，可以更有效地促进抗原呈递细胞（APC）的摄取。本文利用带正电荷并富集精氨酸的鱼精蛋白（PS）包覆PLGA包裹乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的纳米粒表面，考察纳米粒对小鼠传代树突状细胞DC2.4的吞噬效果影响，对小鼠原代骨髓源树突状细胞（BMDC）的表型、细胞因子分泌的影响，以及对小鼠体内免疫的影响。本文开展的主要工作有： （1）复乳溶剂挥发法制备PLGA包裹HBsAg纳米粒（HBsAg/PLGA）和PS包覆的PLGA包裹HBsAg纳米粒（HBsAg/PLGA/PS），并进行表征：采用激光粒度仪测定其粒径（size）、多分散系数（PDI）、表面电位（Zeta-potential），ELISA测定HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒的包封率。结果为HBsAg/PLGA纳米粒size为293.4±6.9 nm，PDI为0.109±0.070，Zeta-potential为-21.8±1.6mV，包封率为45.23±6.19％。HBsAg/PLGA/PS纳米粒size为330.5±14.1 nm，PDI为0.210±0.019，Zeta-potential为9.6±1.3 mV，包封率为47.27±5.56%，纳米粒表面包覆PS后，Zeta-potential由负电荷转变为正电荷。用透射电镜观察 HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒，发现纳米粒为球形并具有典型核-壳结构。此外，考察了HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒的体外释放与稳定性情况。 （2）本文制备了FITC-OVA/PLGA纳米粒和FITC-OVA/PLGA/PS纳米粒。通过流式细胞仪考察了FITC-OVA/PLGA、FITC-OVA/PLGA/PS纳米粒对DC2.4的摄取效率的影响。结果表明，PS包覆的纳米粒可显著地促进DC2.4对FITC-OVA的摄取。从小鼠骨髓细胞中分离分化原代BMDC并考察了HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒对BMDC表面主要组织相容性复合物I类分子（MHCI）、主要组织相容性复合物II类分子（MHC II）、CD80、CD83和CD86等BMDC表面分子表达的影响，发现HBsAg/PLGA纳米粒可以显著增强MHC II和CD86的表达，而HBsAg/PLGA/PS纳米粒可以显著增强MHCI、MHCII、CD83和CD86的BMDC表面分子的表达。考察HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒对BMDC分泌的IL-4、 IL-12p70等细胞因子的影响，发现HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒均可显著促进IL-4、IL-12p70的分泌，其中，HBsAg/PLGA/PS纳米粒促进IL-12p70分泌能力更强。 （3）本文对HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒在小鼠体内诱导体液免疫和细胞免疫的能力进行了评价，HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS纳米粒均显示出一定的诱导血清中IgG反应和诱导Th1型细胞免疫的能力，而以HBsAg/PLGA/PS纳米粒诱导能力较强。结果表明，PS的表面修饰对PLGA纳米粒在小鼠体内的免疫效果有更强的增强作用。 综上所述，HBsAg/PLGA纳米粒和HBsAg/PLGA/PS纳米粒作为疫苗HBsAg的纳米载药系统，可以有效地增强HBsAg的免疫应答。与HBsAg/PLGA纳米粒相比，HBsAg/PLGA/PS纳米粒的促进效果更佳，有可能卡发成为一种新型的纳米疫苗载体。