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禾顶囊壳是禾本科植物根部重要的寄生菌,可以引起许多禾谷作物,草坪禾草及禾本科牧草的全蚀病,为众多的植物病理学家所关注。禾顶囊壳在我国分布广泛,北方麦区及玉米产区均有该菌的危害,对小麦生产造成严重的威胁。尽管国内在禾顶囊壳的鉴定及生物学特性方面开展了一些工作,但是禾顶囊壳的致病性分化,群体遗传差异,变种的分类地位及诊断方法仍需要进一步研究。因此,本文在这些方面对我国的禾顶囊壳进行了研究,主要取得了以下结果。 1、分离了陕西,甘肃,宁夏全蚀病区63个菌株,用1/2PDA培养基和麦杆酵母提取物培养基可以诱导形成子囊壳,测量发现子囊壳,子囊孢子、附着枝、分生孢子均与来自德国和澳大利亚的菌株相似,证实我国小麦全蚀病病原菌为禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomyces graminis var.tritici Walker)。研究发现中国禾顶囊壳群体的子囊孢子尺度有变异,依据其长度可分为三个组:Ⅰ组子囊孢子长度为67-74μm,Ⅱ组,75-82μm,Ⅲ组,83-89μm。以平板培养基测定了所有菌株的生理特性,所有参试菌株在含7.5%的鲜燕麦汁PDA培养基平板上生长被抑制,生长速度为0.12mm/d,含0.1%L-半胱氨酸的PDA培养平板可以促进禾顶囊壳菌株的生长,生长速率为15.92 mm/d。禾顶囊壳可以生长的温度为5-30℃,生长最适温度为20-25℃。可以生长的pH值为4.0-10.0,最适pH值为6.0-8.0。 2、用菌饼法测试了禾顶囊壳小麦变种对小麦、高粱、水稻、糜子、黑麦、玉米的致病性,结果表明,大部分参试菌株可造成供试谷物根部组织坏死或腐烂,个别菌株也可导致燕麦根皮层的坏死。用51个供试菌株测试对玉米的致病性发现,禾顶囊壳小麦变种在玉米根部的致病性呈连续性变化,由不能致病至强致病,31.3%的小麦变种菌株在玉米上的致病性超过禾顶囊壳玉米变种菌株,这些菌株在不同玉米品种上的严重度有差异,表明禾顶囊壳小麦变种群体在玉米上的致病性有分化。 3、建立了用于禾顶囊壳遗传分析的RAPD最适体系。对参试的34个顶囊壳菌株用RAPD指纹构建的亲缘关系树与依据形态学及致病性划分的变种单元相一致,禾顶囊壳小麦变种内部存在着较大的遗传差异,来自德国的菌株与中国菌株间亲缘关系较远,表明顶囊壳群体的遗传结构与地理距离存在相关性。在中国菌株内部菌株间的差异与生境无明显的相关性。 4、测定了3个禾顶囊壳玉米变种中国菌株及8个禾顶囊壳小麦变种中国菌株的rDNA序列。21个限制性酶切消化rDNA表明,禾顶囊壳玉米变种与小麦变种间在SmalⅠ位点存在长度多态性。rDNA序列比对结果显示,各变种间有稳定的差别。禾顶囊壳各个变种间可以用 ITS序列区分,禾顶囊壳玉米变种与 P zejcolo和 P radlcfcol。亲缘最近,前者很可能是后者的有性态,禾顶囊壳小麦变种是多型群,中国菌株9802和9735与英国禾顶囊壳小麦变种的黑麦致病性菌株RI亲缘最近。 5、比较禾顶囊壳玉米变种与其它顶囊壳间的ITS序列,发现玉米变种在ITS区有特异性序列组成,据此设计了一条20nt的禾顶囊壳玉米变种专化性引物GgnF,与引物ITS4构成引物对,以基因组DNA和rDNA-PCR扩增产物为模板,均可检测到禾顶囊壳玉米变种的特征性DNA片段,检测灵敏度下限为lgg基因组DNA。将禾顶囊壳玉米变种特征性RAPD标记0叫19-250和禾顶囊壳小麦变种特征性趴叩标记OPm卜900,分离,克隆,测序,构建了禾顶囊壳玉米变种特异引物对CPN253-1/CNP253-2和小麦变种的特异性引物对CPN659-1/CPN659-2,以基因组DNA为模板,CPN253-1/CNP253-2可从禾顶囊壳玉米变种扩增到目标片段22SbP,CPN659-1/CPN659-2可以从禾顶囊壳小麦变种扩增到目标片段473hP,在其它参试禾顶囊壳及相关根部病原菌菌株中无扩增产物,检测灵敏度下限为10pg。3对专化性引物从接种10天的根组织中可以扩增到目标片段,Southern杂交证实了引物在根部检测的特异性。