山豆根是豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep.的干燥根及根茎,具有清热解毒,消肿利咽之功效,可用于治疗咽喉牙龈肿痛、急性扁桃体炎、支气管炎、肺炎、慢性活动性肝炎、肿瘤及心律失常等疾病的治疗。山豆根属于有毒中药,主要含有生物碱类、黄酮类、三萜皂苷类等化学成分,其中生物碱类成分,既是其有效成分,也是其毒性成分。山豆根的毒副作用及不良反应的报道较多,这极大的限制了山豆根的临床应用。配伍是中药的一大特色,山豆根是否可以通过配伍来达到减毒增效(存效)的效果,值得我们关注和研究。本研究以山豆根单煎汤剂及其与射干、升麻配合使用的合煎汤剂为研究对象,从化学组成、主要化学成分的含量、总生物碱及总酚的含量等方面研究山豆根配伍前后的化学成分及其含量的变化,同时,对山豆根单煎、合煎汤剂的急性毒性及抗炎活性进行比较研究,试图揭示化学成分-毒性-药理活性效应的相关性,为山豆根临床用药的安全、有效提供科学依据。本论文主要分为以下几部分(一)采用临床常用的煎煮方法,制备了山豆根的单煎汤剂及其与射干、升麻配伍使用的合煎汤剂;然后采用UPLC-QTOF技术,对山豆根单煎、合煎汤剂的化学组成进行了定性比较。从山豆根单煎、合煎汤剂中共计发现了 35个生物碱类化合物,其中,单煎剂23个,合煎剂28个;单煎剂独有7个,合煎剂独有12个,二者共有16个。PCA分析发现,山豆根单煎、合煎汤剂的两组样品组内聚集,组间分离良好,表明山豆根单煎、合煎汤剂所含生物碱类成分具有显著性差异;此外,从PCA分析中的成分分布散点图,找出了氧化苦参碱、苦参碱、槐醇等10种生物碱类成分作为山豆根单煎、合煎汤剂的差异性成分。采用大孔吸附树脂-聚酰胺树脂联用法,制备了山豆根单煎汤剂的生物碱部位和非生物碱部位并对其化学组成进行了 UPLC-QTOF定性鉴别。研究发现,山豆根生物碱部位所含生物碱类成分的种类与山豆根单煎汤剂中所含生物碱类成分的种类基本相同;从山豆根非生物碱部位定性鉴定了 35个化合物,其中黄酮类19个,皂苷类14个。由此表明,山豆根非生物碱部位主要由黄酮类和皂苷类成分组成。(二)采用HPLC-DAD法建立了同步测定金雀花碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、N-甲基金雀花碱、槐醇、苦参碱和槐果碱等7种生物碱类成分和高丽槐素,三叶豆紫檀苷,芒柄花素等3种黄酮类成分的含量方法。方法学验证结果显示,10种成分的分离度良好,且在各自浓度范围内呈现出良好的线性关系,r≥0.999 7,平均回收率在98.6%～102.6%,RSD为0.68%～3.66%(n=6),该方法简便、准确,重复性良好。运用该法,对山豆根饮片、单煎及合煎汤剂中的10种主要成分的含量进行了测定。不同批次的山豆根饮片的含量测定结果表明,山豆根的内在质量存在较大差异。3批次的山豆根在煎煮过程中,10种成分的总转移率分别为53%、64%和55%,其中,氧化苦参碱、氧化槐果碱、金雀花碱、N-甲基金雀花碱、芒柄花素、马卡因和三叶豆紫檀苷含量降低,而苦参碱、槐醇、槐果碱含量增加,表明山豆根在煎煮前后化学成分的含量变化,不仅与其煎煮中的成分转移率有关,而且与煎煮过程中发生的化学反应有关。此外,与山豆根单煎汤剂相比,山豆根合煎汤剂中的6种生物碱类成分的含量均有所降低,其中,以氧化苦参碱的含量降低幅度最大,苦参碱的含量降低幅度最小。由此表明,山豆根与射干、升麻合煎,可以促进山豆根中的生物碱类成分发生转变,山豆根单煎、合煎汤剂的主要生物碱类成分具有一定的差异。(三)分别采用酸性染料法和三氯化铁-铁氰化钾法对山豆根饮片及山豆根单煎、合煎汤剂的总生物碱和总酚含量进行了测定。研究结果表明,山豆根单煎过程中,总生物碱的转移率明显高于总酚;山豆根合煎汤剂中的总生物碱的含量明显低于单煎汤剂中的含量,亦具有一定差异,进一步验证了山豆根在与射干、升麻合煎过程中,生物碱类成分可以通过成分间的相互作用,发生分解和转化。山豆根合煎汤剂中的总酚含量明显高于山豆根单煎汤剂,这与射干和升麻中亦含有酚类成分有关。(四)为了比较山豆根配伍前后的毒性效应,对山豆根单煎、合煎汤剂及阴性对照汤剂(射干+升麻)进行了小鼠急性毒性实验,研究结果表明,山豆根单煎汤剂组的各个剂量组的小鼠死亡率均高于山豆根合煎汤剂组,阴性对照汤剂组无小鼠死亡记录。以山豆根的生药量计,山豆根单煎汤剂的LD50为19.6 g/kg,山豆根合煎汤剂的LD50为31.7 g/kg。山豆根配伍射干升麻后,具有降低山豆根毒性的作用。(五)为了比较山豆根配伍前后的药理活性,采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀急性炎症模型,对山豆根单煎、合煎汤剂及阴性对照汤剂进行了抗炎活性研究。研究结果表明,与模型对照组比较,山豆根单煎、合煎汤剂及阴性对照汤剂均具有明显的抗炎活性;阴性对照汤剂与山豆根单煎、合煎汤剂的抗炎活性相当,无统计学差异(P>0.05);山豆根单煎汤剂与山豆根合煎汤剂的抗炎活性相当,也并无统计学差异(P>0.05)。因此表明,山豆根配伍射干和升麻使用后,对抗炎活性具有存效作用。综上所述,本研究从化学成分、急性毒性和抗炎活性等方面,对山豆根单煎汤剂及其与射干、升麻配伍使用的合煎汤剂进行了比较研究,为揭示化学成分-毒性-药理活性效应的相关性及阐述配伍减毒增效(存效)的内因提供科学依据。